BALB/C CPA3CRE/+（参考9），C57BL/6 CPA3CRE/+（REF。9），BALB/C MCPT8-CRE51，BALB/C CPA3 - / - （参考52），BALB/C CPA3Y3556L，REF。53），balb/c cpa3y356l，e378a（e378a），e378a（e378a（e378a），balb/c。在C57BL/6或（BALB/C×C57BL/6）F1背景的BALB/C MCPT6 - / - （参考文献55）和NR4A1-GFP56小鼠的NR4A1-GFP56小鼠中，在DKFZ Heidelberg的小鼠育种设施中保持了。BALB/C IGH-7 - / - （参考11）小鼠在伦敦帝国学院繁殖，并在海德堡大学的跨学科神经行为核心用于实验。BALB/C野生型小鼠和C57BL/6 Wnt1 | GCAMP3（Wnt1-CRE; R26R-GCAMP3）将57,58只小鼠保持在Ku Leuven的小鼠育种设施中。在20–24°C和45–65％的湿度下，在受控环境中，将小鼠的白天和夜间周期饲养。所有行为测试均对成年（> 7周大）的女性和雄性小鼠进行。对CPA3CRE/+，MCPT8-CRE，CPA3Y356L，E378A，CPA3 - / - 和MCPT6 - / - 小鼠的对照是性别匹配的，并且是年龄匹配的野生型垃圾。对IGH-7 - / - 和HDC - / - 小鼠的对照进行性别匹配，并在同一动物室中安装的年龄匹配的野生型小鼠。所有动物实验均根据机构和政府法规进行。Heidelberg的实验得到了德国RegierungspräsidiumKarlsruhe的批准。鲁汶的实验得到了比利时鲁南鲁文库文鲁文的动物保健和动物实验委员会的批准。

　　Mice were actively immunized by intraperitoneal injection with 25 μg OVA (Sigma-Aldrich) complexed with 2 mg Al(OH)3 (alum) (InvivoGen) on days 0 and 14, and avoidance tests started on day 20. For Th2 cytokine treatment, mice were injected intraperitoneally with a cocktail composed of 2 μg IL-3 (Peprotech), 12 μg抗小鼠IL-3（MP2-8F8，Biolegend），2μgIL-4（peprotech），12μg抗小鼠IL-4（11B11，Biolegend）和0.4μgIL-9（peprotech）（peprotech）在第2和16天与Anti-il-3 Antib-3-3-3-8抗IL-4抗体11B11产生细胞因子 - 抗体复合物，显示体内活性的增加，我们在此处利用这增加了体内细胞因子效应的幅度和持续时间。对于IL-9，尚未描述这种影响；因此，不使用抗IL-9抗体。为了进行被动敏化，将小鼠在第0天进行腹膜内注射，并在第9天进行静脉注射，并用10μg抗OVA IgE IgE单克隆抗体（E-C1，​​Chondrex）和胃内挑战（过敏反应）或避免测试在第10天开始。

　　保持小鼠在智能上可以防止处理引起的压力，从而可以观察自然行为60。对于全身免疫，如上所述，小鼠在第0天和第14天注射了两次OVA-ALUM。在第17天，小鼠在异氟烷麻醉下接受了独特的射频鉴定（RFID）应答器的皮下植入物，并将其放置在13-16只动物组中的智能设备（TSE系统）中。将小鼠保持在12小时的光线周期中，并可以使用Ad Libidum进入食物和水。适应（1-3天）后，将八个瓶子中的四个瓶中的水交换了20％（v/v）蛋清，含有0.25％（w/v），1％（w/v）（c57bl/6）或8％（w/v）（w/v）（balb/c）蔗糖。分析饮酒行为长达14天。使用Intellicage Plus软件（NewBehavior AG）收集数据。

　　为了被动敏化，如上所述，小鼠在第0天和第9天注射了两次单克隆抗OVA-IGE。在第11天，小鼠在异氟烷麻醉下接受了独特的RFID应答器的皮下植入物，并放置在智能设备中。将小鼠保持在12小时的光线周期中，并可以使用Ad Libidum进入食物和水。适应后，将八个瓶子中的四个瓶中的水交换了20％（v/v）含8％（w/v）蔗糖的蛋清。分析饮酒行为长达14天。使用Intellicage Plus软件（NewBehavior AG）收集数据。

　　蛋清（20％v/v）如下：将鸡蛋白与蛋黄分开，在水中稀释，并通过滤纸（3级HW; 65 g M -2; ahlstromMunksjö）进行紧张。每毫升的20％蛋清溶液平均包含0.78±0.17内毒素单位，该单位大大低于标准小鼠ChOW61。

　　第二次免疫后一周，BALB/C CPA3+/+和BALB/C CPA3CRE/+或基因敲除小鼠及其相应的同窝小鼠分别容纳。笼子配备了两个相同的瓶子，一个瓶子含有水，另一个含有20％的鸡蛋白水和8％的蔗糖。根据十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果，20％的鸡蛋白水溶液含有约40 mg ml -1 ova（未显示）。每24小时称重瓶子，然后更改瓶子的位置，以控制饮酒行为的侧面偏好。回避测试进行长达7天。

　　小鼠每2-3天通过一次性胃内烤（7天治疗，4×gavage; 11天，6×gavage;持续16天，8×8×gavage）。每次烤后1小时检查小鼠的腹泻。与这种OVA饲料相比，在智能实验中，肥大细胞缺陷的BALB/C CPA3CRE/+小鼠的自愿消耗平均每天586 mg OVA。因此，烤剂给出的抗原量不高于桅杆缺陷型小鼠自愿消耗的抗原量。

　　如上所述，用OVA-ALUM免疫小鼠。在第20天，小鼠被剥夺了一夜之间的饮用水。palonosetron（Sigma-Aldrich）在回避测试前以0.5 mg kg-1 12 h的剂量注入腹膜内注射。MK-886（ABCAM）在回避测试前的剂量为10 mg kg-1 1小时，通过胃内膨胀剂施用。由于用MK-886重复给药可以改变小鼠的行为62，因此我们只给小鼠一个剂量，然后进行1天的观察。Intellicage（MK-886）和两瓶测试（MK-886; PalonoSetron）持续24小时。

　　如上所述，用OVA-ALUM免疫小鼠。在第20天，将NR4A1-GFP小鼠单独容纳。剥夺了12小时后，笼子配备了一个含有25％OVA（Sigma-Aldrich）水的瓶子。给对照小鼠在水中含有25％牛血清白蛋白（BSA）的瓶子。3小时后，称重瓶子以检查瓶子的消耗，并对小鼠进行安乐死以进行进一步分析。通过流式细胞仪监测纯化的肥大细胞的激活以进行GFP表达。

　　为了分析NR4A1-GFP小鼠的过敏反应，如上所述，用OVA-ALUM免疫小鼠。在第21天，小鼠接受了50 mg OVA（Sigma）或50 mg BSA（Sigma）的胃内膨胀膨胀，并使用直肠温度计监测其体温。3小时后，将小鼠安乐死以进行进一步分析。如上所述监测纯化的肥大细胞的激活。

　　如上所述，用OVA-ALUM免疫小鼠。在第10天，在OVA免疫接种之间，将树脂毒素（Cayman Chemicals）在三种升级的剂量（30、70和100μgkg -1）连续地下注入侧面。对照小鼠用媒介物（磷酸盐缓冲盐水（PBS）中的二甲基亚氧化二甲基亚氧化物）处理。在第20天，通过长期戒断对有害热（52°C）的戒断潜伏期（尾部轻弹测试；未显示数据），证实了TRPV1的神经保护作用。从第二天开始，通过两瓶测试分析了避免OVA。

　　如前所述，制备了牙龈单细胞悬浮液。63。简而言之，在37°C的RPMI中，在37°C的RPMI中消化了口感和下颌骨，并补充了10％的胎牛血清（FCS; Sigma-Aldrich），0.15μgDNaseI和3.2 mg mg mg ml-1 collagenase IV（来自Sigma-Aldrich）。然后，在最后5分钟内添加了0.5 m EDTA（ROTH），并通过70μm细胞滤网（Thermofisher）过滤上清液。从口感上剥离了未消除的牙龈组织并下颌骨，并通过相同的过滤器捣碎以产生牙龈细胞悬浮液。

　　通过将舌头切碎并在37°C下在37°C的RPMI中添加0.1 mg ml-1 liberase（Sigma-Aldrich）和2.5μgml-1 dnase I（Sigma-Aldrich），在37°C的RPMI中在37°C的RPMI中以37°C的速度消化了三轮15分钟，制备了舌头单细胞悬浮液。每一轮消化后，将细胞悬浮液通过70μm细胞滤网（热泡）过滤，并将新的酶溶液添加到组织中。将所有分数组合在一起以产生舌头单细胞悬浮液。

　　为了分离胃中上皮细胞，切开胃并去除食物残余物。将胃在37°C的HBSS中孵育15分钟，并补充了20 mM EDTA（ROTH），以从结缔组织释放上皮层。将细胞悬浮液应用于带有100μm锆珠（Roth）的自旋柱（热泡）。离心后，收集流动，产生了含有粘膜胃肥大细胞的上皮内细胞悬浮液。

　　为了制备小肠细胞悬浮液，切开小肠并去除食物残余物。将肠在37°C的HBSS中孵育15分钟，其中补充了2％FCS（Sigma-Aldrich），5 mM EDTA（ROTH），1 mM DTT（MERCK）和10 mM HEPES（LIFE TECHICES），以从连接组织中释放上皮层。通过70μm细胞过滤器（Thermofisher）过滤可溶性馏分中的细胞（含有上皮内肥大细胞）。将剩余的肠道组织在PBS中洗涤，并转移到补充了2％FCS（Sigma-Aldrich），20 mM HEPES（Life Technologies），0.2 mg ML-1胶原酶IV（Sigma-Aldrich），SIGMA-ALDRICH），0.5 mg ml-1 hluronididase I（SIGMA-ALDRICH），0.5 mg -1 hyaluronidase I（SIGMA-ALURonIDASE I（SIGMA-AL）I（SIGMA-ALRonIDASE I（SIGMA-AL）I（SIGMA-AL）I（SIGMA-ALDRICMAS）和0.1 DN和0.1 dn MGMMA-ALDRICH，（Sigma-Aldrich）。消化在37°C下进行30分钟，并通过100μm的细胞过滤器（热泡）过滤消化的组织，从而产生固有层（包含层层状肥大细胞）。

　　血液是通过心脏穿刺抽取的，然后根据制造商的方案（RBC裂解缓冲液，Biolegend）进行红细胞裂解。

　　将单细胞悬液离心并与200μgml-1小鼠IgG（Jackson Immunoresearch Laboratories）一起孵育15分钟以阻断Fcγ受体。用补充了5％FCS（Sigma-Aldrich）的PBS洗涤后，用荧光偶联抗体（请参阅抗体部分中的列表）将细胞染色20分钟，并在冰上受到保护。将细胞洗涤并用100 nm Sytoxblue（生命技术）孵育，以进行死细胞排除。为了绝对定量细胞，在用BD LSRFORTESSA（Becton Dickinson）分析之前，将定义的123个计数eBead（生命技术）添加到样品中。使用FlowJo软件（Treestar）分析数据，使用补充图1中所示的门控策略。舌和牙龈中的肥大细胞被视为活的CD45+MHCII -CD11B -CD11B -CD117+FCεRI+细胞。将胃肥大细胞门控为活的CD45+CD117+FcεRI+/IgE+细胞。将肠道肥大细胞作为活的CD45+CD3-CD11b-CD19-GR-1-119-CD117+FCεRI+细胞。中性粒细胞被门控为活的CD45+CD11b+Siglec-F-1+/Ly6g+细胞。嗜碱性粒细胞被鉴定为活的CD45+CD90.2-CD11C-GR-1-SIGLEC-F-MHCII-B220-CD49B+IGE+IgE+细胞。有关试剂，请参见“抗体”部分中的列表。

　　为了分析胃肥大细胞中Ca2+通量的分析，胃内白细胞旋转并恢复在钙成像缓冲液中（125 mm NaCl，3 mm KCl，2.5 mm CaCl2，2.5 mm CaCl2，0.6 mmgcl2，MMMMMMMMMMMMMMMM MM Hepes，10 mm Hepes，20 mm gluc gluced in NaOh，1.2 mmMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM MM MM MM MM MM）具有0.1％BSA（ROTH），2.5 mM probenecid（Biotinum），0.01％Pluronic-F127（Sigma-Aldrich）和200μgml-1小鼠IgG（Jackson Immunoresearch Laboratories），以阻止FCγ受体。用钙成像缓冲液洗涤后，将细胞用4μMFluo-4（Thermo Fisher Scientific）和CD45 BV421，CD117 PE和FcεRIAPC抗体在室温下在黑暗的室温下染色30分钟。然后用补充了0.1％BSA（ROTH）和100 nm SytoxBlue（Life Technologies）的钙成像缓冲液洗涤细胞。在测量过程中，将细胞保持在37°C，并在BD LSRFORTESSA（Becton Dickinson）上进行分析。基线测量值30 s后，将OVA（Sigma-Aldrich）添加到最终浓度为1.25 mg ml-1，并获得90 s的Fluo-4荧光。作为阳性对照，在测量的最后30 s中，将离子霉素（Sigma-Aldrich）添加到最终浓度为16.4 mmol ML-1。使用FlowJo软件（BD Bioscience）分析数据。

　　如上所述制备胃中上皮细胞。将细胞与僵尸（1：500，Biolegend）一起孵育，以进行死亡/活歧视，在室温下在室温下阻断Fcγ受体15分钟，以阻止Fcγ受体15分钟。用补充了5％FCS（Sigma-Aldrich）的PBS洗涤后，用CD45 BV785，CD117 APC和IgE BV421（R35-72，BD Bioscience）染色细胞在冰上染色20分钟，并在冰上保护并免受光线保护。洗涤和离心后，根据制造商的说明，使用FOXP3内细胞染色试剂盒（Biolegend）固定细胞并透化。将细胞用0.11μgml-1抗5-HT（5HT-H209，DAKO）或同型对照抗体染色30分钟，在PBS中洗涤，并用抗小鼠-IGG1（RMG1-1，Biolegend）染色30分钟，然后用BD LSRFortessa（Bd Lsrfortessa（Bd lsrfortessa）（Bd lsrfortessa（Bd lsrfortessa））。

　　如前所述64，通过酶联免疫吸附测定法测量OVA特异性IgE和IgG1。使用抗OVA IgG1（L71，Biozol）和抗ova IgE（2C6，Invitrogen）作为标准。大鼠抗小鼠IgG1-HRP（1：2000，X56，BD Pharmingen）和大鼠抗小鼠IGE-HRP（1：2000，23G3，SouthernBiotech）用于检测。将血清样品稀释1：40000（IgG1）和1:10（IgE）。根据制造商的说明，通过LegendPlex小鼠TH细胞因子（Biolegend）测定法测量IL-4和IL-6。

　　对于离体Ca2+成像，免疫的成年Wnt1 | GCAMP3小鼠的回肠或免疫和AAV9-Transded（Penn.aav.camkii.gcamp6f.wpre.sv40，addgene，addgene）CPA3+/+/+/+/+和CPA3CRE/+小鼠是隔离的。Tissues were opened along the mesenteric border and pinned flat in a Sylgard-lined dish containing Krebs solution (120.9 mM NaCl, 5.9 mM KCl, 1.2 mM MgCl2, 1.2 mM NaH2PO4, 14.4 mM NaHCO3, 11.5 mM glu​​cose and 2.5 mM CaCl2), bubbled with 95% O2/5% CO2 at room temperature.用krebs洗涤清除腔含量。将组织安装在Inox环上，并使用匹配的橡胶O-Ring65稳定。将环制剂放在玻璃底盘上，并在配备有单色器（Poly V）和冷却的CCD摄像头（Imago QE）的倒置的Zeiss Axiovert 200M显微镜上使用×20物镜成像（直到光元素）。使用局部重力喂养（±1 ml min-1）灌注移液器，在室温下，在室温下不断将制剂与碳化的Krebs溶液进行超级融合。仅KREBS，BSA（KREBS中的1％）和OVA（在KREBS中为1％）使用位于成像的Myenteric或粘膜粘膜丛中上方的灌注移液器，将每个分别用于5分钟。使用Igor Pro（WAVEMERTIC）66中的定制写入例程进行分析。热图显示了归一化的荧光（FI/F0）痕迹，每行在对照Krebs条件下显示单个神经元的荧光信号，其次是BSA（1％）和OVA（1％）粘膜灌注。在KREBS条件下，将每个神经元的信号归一化为基线荧光。在热图中描绘的痕迹由检测到的信号的最大幅度自上而下。对于激活神经元的百分比，在每个表达GCAMP的神经元上绘制了感兴趣的区域，以计算标准化为基线的平均Ca2+信号强度（以FI/F0表示）。在某些记录上进行了背景减法，在某些记录中，背景强度的变化显而易见。如果在每5分钟记录期间检测到至少一个神经元Ca2+峰，则认为神经元被认为是活跃的。

　　如前所述进行了迷走神经切开术。简而言之，两个迷走神干均在隔膜下方的下方。为了确保所有小型迷走神经分支的横向，去除食道周围的神经和结缔组织。进行幽门成形术，以避免由于迷走术引起的胃扩张。对照小鼠进行了假手术，其中迷走式树干被暴露但未切割，并且进行了幽门成形术。

　　幼稚，免疫和挑战（两瓶测试的第5、7或11天；或4×，6×或8×ova gavage）BALB/C CPA3+/+和CPA3CRE/+小鼠由CO2窒息而安乐死。切开胃和小肠碎片（与十二指肠近端4厘米），并去除食物残余物，脂肪和佩耶的斑块。立即将组织在液氮中冷冻，并在带有杵的砂浆中磨碎。根据Purelink RNA迷你试剂盒（Invitrogen）的指示进行RNA分离。总RNA质量由生物分析仪系统提供的RNA完整性数（RNA 6000 PICO KIT，Agilent）确定。将分离的RNA存储在-80°C下，直至使用。

　　根据制造商的说明，使用Truseq滞留的RNA套件（Illumina）进行图书馆准备。库准备后，将索引样品汇总并用2％的phix尖峰稀释至2 nm。然后使用NextSeq 1000/2000 P2试剂（200个循环）在NextSeq 1000/2000平台上使用NextSeq 1000/2000 P2试剂（200个循环）配对多路复用库（条件：read1/read2：111 cycles; Index1：8 cycles; Indcles; Indcles; Indcles; Indcles; Indcles; Indcles; Indcles; insex2：8 Cycles; 8 Cycles; 8 Cycles; 8 Cycles; 8 Cycles；使用Star Aligner（v.2.5.2b）68映射数据，并使用subread软件包（v.1.5.1）69的featurecounts算法进行注释。在基因组参考联盟构建38（GRCM38）70上进行了映射和注释。使用DESEQ2（参考文献71）进行了计数数据归一化和差异表达分析，将免疫的无挑战小鼠与受到两瓶测试或OVA饲料挑战的相同基因型的免疫小鼠进行了比较。

　　主成分分析是根据基于前500个最多可变基因的DESEQ2软件包中包含的变异稳定转换归一化的读数计数进行的。对于随后的数据分析和可视化，使用APEGLM实现72计算了对Log2折叠变化（LFCSHRINK）零的收缩（LFCSHRINK）。使用Benjamini – Hochberg算法调整P值，如果调整P< 0.05.

　　Gene set enrichment analysis (GSEA) for each experimental group was performed on the complete dataset ranked with lfcshrink using ClusterProfiler73. All gene ontology (GO) terms related to ‘biological processes’ in the org.Mm.eg.db database74 were considered. Significantly (Benjamini–Hochberg adjusted P < 0.05) enriched GO terms were accepted for further processing. based on the individual descriptions, enriched GO terms were manually annotated into four immune-related subgroups: innate immunity, adaptive immunity, mucosal immunity and chemotaxis (annotation of individual GO terms can be found in Supplementary Table 1). From subgrouped GO terms, core enrichment genes (genes that contribute most to the enrichment results for a GO term; GSEA documentation on the Broad website) were extracted and filtered (log2 fold change <−1 or log2 fold change >1.5 in at least one comparison). Fold changes of these genes were compared between experimental groups (Fig. 3a,c and Extended Data Fig. 7b,c).

　　Genes contained in the ‘hallmark inflammatory response’ gene set were retrieved from the Molecular Signatures Database (hallmark gene set collection: M5932, MSigDB)14, and their fold changes in wild-type mice under avoidance and non-avoidance conditions were compared.

　　In the volcano plots, horizontal lines indicate the significance threshold and vertical lines indicate the log2 fold change thresholds of −3 and 3, respectively. GSEA core enrichment genes are indicated in red, and manually curated mast-cell-related genes are depicted in blue (Fig. 3c–f). DEG with log2 fold change >3在胃中（图3C，D）和肠道（图3E，F）被过滤并显示为热图（图3G）。在此热图中，在其他比较中没有显着差异表达的基因被描述为白色正方形。表达变化显着（P <0.05）的基因具有彩色正方形。颜色尺度指示log2折叠更改。

　　使用升高的迷宫，开放式测试和灯光测试对焦虑状行为进行了测试。小鼠倾向于光线亮的开放区域。但是，他们有自然的动力来探索感知到的威胁性刺激。低水平的焦虑会导致探索行为的增加，而高水平的焦虑会导致运动较少，并且在封闭区域花费的时间更多。在09:00到13:00之间进行了类似焦虑的行为的测试。在行为测试开始前30分钟，将C57BL/6 CPA3+/+和CPA3CRE/+小鼠带入行为室。在测量结束时，用肥皂和70％乙醇清洁所有实验设置。

　　高架迷宫由一个不透明的灰色塑料装置组成，该设备具有四个手臂（6厘米宽，长35厘米），两个开放式（用100 lux照明）和两个闭合（20 lux），位于中性中央交叉点（6×6厘米）的十字架中，并在地板上方的70厘米处坐落。将小鼠放置在迷宫的中心，并通过数字记录5分钟的测试课程，并使用Sygnis Tracker软件（SYGNIS）进行分析。

　　对于开放式测试，将小鼠放置在明亮的开放竞技场的中心（40厘米宽，40厘米长，高40厘米； 290 lux），并使用数码相机和任何迷恋视频跟踪系统（Stoelting Co.）监测其行为10分钟。

　　用于浅色树木测试的行为测试箱由两个隔间组成，一个29×21厘米（21厘米高； 300 lux照明）灯室和一个15×21厘米（21厘米高； 10 lux照明）深色舱室，通过在隔间之间的地板上的开口连接。将小鼠放置在深色隔间中，并使用数码相机和Sygnis Tracker软件监测其行为10分钟。

　　Labars Home Cage观察系统（Metris B.V.）由放置在碳纤维平台上的适应性家用笼子组成，该笼自动检测到动物75产生的行为特异性振动模式。Labaras软件（v.2.6。）将振动处理成各种经过验证的行为（攀登，修饰，固定力）和跟踪信息（距离旅行和速度）。这些行为参数会自动计算为时间持续时间或频率计数。C57BL/6 CPA3+/+和CPA3CRE/+小鼠在标准住房条件下单独放置在这些校准的笼子中，并在24小时内免费获得食品和水。在实验开始之前，小鼠没有习惯于拉手笼子。

　　流式细胞仪中使用以下抗体：B220 FITC 1:50（BD Pharmingen，RA3-6B2），CD3 BV421 1：200（17a2，biolegend），CD3 FITC 1：50（17A2，BD Pharmingen），CD3 PE-CY-7 1:25（CD3 PE-CY-7 1:25）（M1/70，Ebioscience），CD11B BV421 1：400（M1/70，Biolegend），CD11B PE-CY-7 1：400 1：400（M1/70，EBIOSCIENCE），CD11C BV421 1：1：100：100BV421 (6D5, BioLegend), CD19 APC 1:400 (1D3, BD Pharmingen), CD45 BV421 1:400 (30-F11, BioLegend), CD45 BV785 1:400 (30-F11, BioLegend), CD49b APC 1:100 (DX5, BD Pharmingen), CD90.2 APC-Cy7 1:400（30-H12，Biolegend），CD117 PE 1：800（2B8，EBISOSCIENCE），CD117 APC 1：800（2B8，BD Pharmingen），CD117 BV711 1：800（2B8，Biolegend，Biolegend），FCεRiAPC 1：200（Mar-1，Mar-1，Mar-1，Mar-1，Gr-1 Bv1 1：800）BioleGend），GR-1 BV605 1：200（RB6-8C5，Biolegend），IgE PE 1：100（RME1，Biolegend），IgE BV786 1：100（RME-1，BD Pharmingen），IgE BV421 1：100（RME-1，BD Pharmingen），BD Pharmingen），100（RME BD Pharmingen），ly6g pers ly6g percp。Pharmingen），MHCII A700 1：100（M5/114.15.2，Ebioscience），Siglec-F BV421 1：100（E50-2440，BD Pharmingen），Siglec-f PE 1：1：100（E50-2440，BD Pharmingen），Ter119 Bv421 1：200（bv421 1：200（ter）0.11μgml-1（5HT-H209，DAKO）和Mouse-IgG1 PE 1：100（RMG1-1，Biolegend）。

　　原理图如图2所示。4A和5和扩展数据图1A，E，J是在Adobe Illustrator（v.25.0.1）中使用生物者并允许发布的。TSE Systems提供了智能的照片，并有权发布（图1B）。

　　有关研究设计的更多信息可在与本文有关的自然投资组合报告摘要中获得。