2025-06-25 01:08来源:本站
规范CRISPR – CAS系统提供了针对移动遗传元素的自适应免疫力1。但是,TN7样的转座子已采用I型I-F,I-B和V-K系统,以指导RNA引导的转座子插入2,3,4,5,6,7。V-K型CRISPR相关的转座子依赖于假核酸酶CAS12K,转座酶TNSB,AAA+ ATPase TNSC和锌指蛋白TNIQ7,但是RNA指导DNA转置的分子机制仍然难以捉摸。在这里,我们报告了CAS12K指南RNA-taRget DNA复合物的冷冻电子显微镜结构,以及来自CIRSPR相关的光合作用Cyanobacterium scynobacterium scytonema scytonema hofmanni hofmanni的CRISPR相关转座子系统的聚合物TNSC丝。CAS12K复合结构揭示了介导RNA引导的靶DNA识别的复杂指导RNA架构和关键相互作用。TNSC螺旋细丝组件依赖于ATP,并伴随着结合的DNA双链体的结构重塑。体内转位测定测定证实了结构的关键特征,生化实验表明TNIQ限制了TNSC聚合,而TNSB直接与TNSC丝相互作用,以在ATP水解时触发其分解。总之,这些结果表明,通过CAS12K Primes TNSC聚合和DNA重塑,RNA指导的目标选择,从而生成了TNSB的募集平台,以催化特定于位点的特异性转座子插入。这项工作的见解将为与CRISPR相关的转座子作为可编程特定地点特定基因插入工具的发展提供信息。