A，开发一种体外培养系统，以监测性腺性别发展。从E10.8 XY或XX胚胎分离出主动脉/性腺/中源性/中源性，然后培养14.4 h，19.2 h和24 h。在每个时间点，将NR5A1+细胞从XY性腺中分离出来，然后应用于定量mRNA表达分析中。培养19.2小时后，SRY表达达到了峰值。另外24小时的时装（总43.2小时培养）与男性型SOX9+细胞或女性型FOXL2+细胞产生性别分化的性腺。B，DFO治疗对体外培养性腺中性腺体细胞数量的影响。19.2-h孵育后，从XY性腺中分离出NR5A1+细胞。所检查的胚胎数量显示在条上方。数据表示为平均值±S.D.C，比较了DFO治疗和未处理的性腺体细胞之间H/L-铁素的表达水平。19.2-h孵育后，将NR5A1+细胞从XY性腺中分离，并引入免疫印迹。根据α-微管蛋白的信号计算相对值。D，来自体外培养的性腺（19.2 h培养物，标记为IVC）的NR5A1+细胞中mRNA表达的PCa，并且在子宫内发育性腺（标记为E11.5）。E，来自体外培养的性腺（19.2 h，标记为IVC）的NR5A1+细胞中涉及性腺发生和/或SRY调节的基因的mRNA热图和/或子宫内发生了性腺（标记为E11.5）。f，维恩图说明了在体外培养的NR5A1+细胞中被DFO处理下调的基因之间的重叠，并且在子宫内开发的NR5A1+细胞中的KDM3A靶基因。蓝色圆圈表示在DFO处理的NR5A1+细胞中被下调的2677个基因（TPM> 0; FOLD CHANGE> 2）。在子宫内开发的NR5A1+细胞中的131 kdm3a靶基因中，在体外培养性腺中检测到100个基因（TPM> 0，以红色圆圈表示）。合并的40个基因代表在DFO处理的NR5A1+细胞中下调的KDM3A靶基因。G，基于RNA-Seq的基因表达值（TPM） JMJC家族在体外培养的性腺中。19.2-h孵育后，从XY性腺中分离出NR5A1+细胞。数据表示为平均值±SD。指示FDR <0.01的平均值之间的所有差异。H，比较了DFO治疗和未处理性腺体细胞之间KDM3A的蛋白表达水平。19.2-h孵育后，将NR5A1+细胞从XY性腺中分离，并引入免疫印迹。根据GAPDH的信号计算相对值。i，比较了DFO处理和未处理的性腺体细胞之间的H3K9ME2水平。19.2-h孵育后，将NR5A1+细胞从XY和XX性腺中分离出来，并引入免疫印迹。根据H3.1/2的信号计算相对值。J，在DFO处理的性腺体细胞中，KDM3A靶基因基因座，myl7和ApoC1的H3K9ME2水平的定量。19.2-h孵育后，将NR5A1+细胞从XY性腺中分离出来，并引入芯片– QPCR。芯片实验是独立进行三次的。数据表示为平均值±S.D.指示P <0.01的平均值之间的所有差异；两尾配对t检验。

　　源数据