A，FSEC-TS74用于HNTSR1（FL）–GI1（左）和HNTSR1（∆ICL3）–GI1（右）。每个轮廓都是两个独立实验的代表。在45°C孵育10分钟后，仅大约50％的HNTSR1（FL）–GI1复合物存活了10分钟，而HNTSR1（FL）–GI1络合物的90％以上后有相同的热应激后生存。B，HntSr1（FL）和HntSr1（∆ICL3）的GTPase-GLO ASSAY39。HNTSR1（FL）和HNTSR1（∆ICL3）的样品量均为3。hntsr1增强了GI1杂三聚体的内在GTP水解活性和GQ Heterotrimer。HNTSR1（FL）和HNTSR1（∆ICL3）蛋白的鸟嘌呤核苷酸交换因子活性同样有效。符号和条代表单个实验的单个价值和平均值。C，细胞表达水平。通过流式细胞仪分析了瞬时表达标志性NTSR1构建体的HEK293细胞。样本量显示在括号中。中心线和错误条代表平均值和S.E.M.指定的实验。使用Dunnett的事后检验的单向方差分析（ANOVA）用于评估统计分析（ANOVA P值= 0.90，在四个样本中没有显着差异（NS）。D – G，纳米毒素G蛋白解离测定。G蛋白解离信号（D，TOP）及其摘要（D，底部）的浓度 - 反应曲线，HNTSR1（FL）和HNTSR1（∆ICL3）。符号和错误条代表均值和s.e.m。指示的独立数量的实验数，每个实验都以重复作用。E，HNTSR1（∆ICL3）（10μMJMV449），β2AR（10μM异丙肾上腺素）和μor（10μMDAMGO）的HNTSR1（ΔICL3）（10μMJMV449）的热图（ΔICL3）（10μMJMV449）的热图。测试GPCR特异性信号变换的平均值（显示了测试GPCR转染的细胞和模拟转染的细胞之间纳米obit-G蛋白解离信号的差异）。GS，GI1，GO，GQ和G13的样品量如下：5、5、5、5和5（HNTSR1），6、5、3、3和3（β2AR）和7、7、6、5和5（μor）。与β2AR和μor不同，NTSR1激动剂（JMV449） 引起所有G蛋白（E）的信号降低，这表明所有G蛋白都可以被HNTSR1识别和激活，并分离为Gα和Gβγ亚基。F，用于全长构建体的野生型HNTSR1和HNTSR1（S93A/L94A/R294A/H373A）的纳米型G蛋白解离测定的摘要。浓度 - 反应曲线如图5B所示。我们使用了使用Holm-Sidak方法进行多次比较的未配对的t检验。NS，与野生类型没有显着差异；** p <0.01。G，nanobit g蛋白解离测定野生型HNTSR1和HNTSR1（S93A/L94A/R294A/H373A）突变体的HNTSR1（S93A/L94A/R294A/H373A）突变体用于ΔICL3构建体。GS，GI1，GO，GQ和G13信号传导的浓度 - 反应曲线（顶部）以及测定结果的摘要（底部）。符号和错误条（顶部）代表均值和S.E.M.指示的独立数量的实验数（底部），每个实验数（底部）以重复作用。我们使用了使用Holm-Sidak方法进行多次比较的未配对的t检验。NS，与野生类型没有显着差异；*p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001。