2025-06-23 16:59来源:本站
一个。在点印刷设置中,抗FLAG抗体未识别游离的标志肽。为了测试抗FLAG抗体是否可以识别用于洗脱尖峰复合物的FLAG肽,我们在硝酸纤维素膜上发现了LASV和MACV SPIKE复合物以及单独洗脱缓冲液,或用Flag peptide(FLAG 1X)进行洗脱缓冲液。带有游离标志肽的洗脱缓冲液仅产生轻微的背景,这表明FLAG肽不粘附在膜上,因此不影响抗FLAG抗体的信号。b。LASV伪型病毒从结合到珠子的IIH6溶液中耗尽。为了测试LASV Spike复合物在假病毒的背景下加载了矩阵,我们孵育基于MLV的伪型病毒,含有LASV或Neuropilin-2-Tropic Lujo病毒(LUJV)的尖峰或与蛋白质 - 蛋白质链的蛋白质链或覆盖均与II HANTS的IIH 6 ant孵育。然后使用RT-QPCR在每个样品的上清液中定量编码荧光素酶报告基因的RNA量。每个点代表单个独立实验中三个技术重复的平均归一化值(独立实验的n = 5)。将每个实验中的测量值标准化为各个未涂层的珠子对照。使用LASV尖峰的假病毒大量(两个尾巴学生的t检验)从IIH6上耗尽了珠子上的溶液。晶须表示最小值和最大值,中心线表示平均值,框表示四分位间范围。LUJV量的略有增加是由于病毒颗粒对未涂层的蛋白-l珠的未特异性吸收而引起的, 这降低了参考控制中的粒子量。c。将尖峰的胞外域部分安装到以C1为中心的地图中,并产生3.7Å的MAP模型FSC。将地图低到3.7Å,并使用此地图再次完善模型。线性矩阵链的顶部和侧视图显示。密度图显示为σ= 4时的蓝色网,在矩阵周围的2.5Å雕刻。对称位点中的xyl-Glca-xyl部分为橙色。绿色显示了不对称位点以及末端xyl-glca的GLCA部分。