C57BL/6 J野生型，EN1TM2（CRE）WRST/J（EN1CRE），B6.CG-GT（ROSA）26Sortm14（CAG-TDTOMATO）HZE/J（R26AI14），B6.129（CG）（CG）-GT（ROSA）-GT（ROSA）26SORTM4（actb-tb-tdttm lu.-----------gegfppppppppppppp（R26MTMG）和B6.129S6（CG）-GT（ROSA）26SORTM1（DTA）JPMB/J（R26DTA）小鼠线从Charles River或Jackson Laboratories获得。PDPNCREER系列是在内部生成的，CD201Creer系列是A. Zeng的礼物。B6.129-HIF1ATM3RSJO/J（HIF1AFLOX）小鼠是Helmholtz Center Munich的糖尿病和肥胖研究所的礼物。动物被安置在Helmholtz中央动物设施中；笼子保持在恒定温度和湿度，并具有12小时的光周期，并随意提供食物和水。所有动物实验均由上巴伐利亚州政府审查和批准，并根据项目55.2-1-1-54-2532-16-61和55.2-2532-19-23登记，以及严格的政府和国际准则。这项研究符合有关动物研究的所有相关道德法规。使用8至12周大的成年小鼠进行动物实验。通过标准PCR和凝胶电泳鉴定相关的基因型。为此，遵循制造商的指南，使用快速提取DNA提取溶液（Epicenter）提取耳朵夹中的基因组DNA。将DNA提取物（1μL）添加到每个19μlPCR反应中。使用含有1×GOTAQ绿色主混合物，0.5μm的Gotaq PCR芯试剂盒（Promega）建立反应混合物。使用了以下引物：EN1-CRE-FW（5'-ATTGCTGTCACTTGGTCGTGGC-3'），EN1-CRE-RV（5'-GGAAAATGCTTCTCGTCCGTTGC-3'），PROCR-GCGGGGGGGGGGGGGGGGGGCGGCAGGCAGCAGTAAAAAAAAAAACATC-CRCRER of PROCR-CRER-CRE（5'-GTGAAACAGCATTGCTGTCACTT-3'），PDPN-CRE-FW（5'-GATGGGGGGAGGAGGAGGGGAGGGAGGAGGCAAGTGTGG-3'），PDPN-CRE-RV（5'-GGCTCTACTTCTACTTCATCATCATCATCATCTCTTGC-3'），HIF1A-FW（5'-TGCATGTGTATGGGTGTTTTG-3'）和HIF1A-RV（5'-GAAAACACTGTCTGTCTGTAACTTCATTTCATTTCC-3''）。所有引物均从Sigma Aldrich获得。用初始变性在94°C的初始变性5分钟进行PCR， 35个循环的扩增（在94°C下变性30 s，在59°C下杂交30 s，在72°C下伸长1分钟），在72°C下延伸10分钟，然后冷却至4°C。在每次运行中，都包括负面对照（非模板和提取）和阳性对照。反应是在Eppendorf主循环器中进行的。通过琼脂糖凝胶中的电泳检测到扩增的带。其他小鼠系（MTMG，AI14和DTA）也保持在纯合背景中。

　　雄性和雌性小鼠在时间组之间平均分布，用于描述性实验。对于功能研究，将同窝窝或年龄匹配的小鼠随机分配到不同的实验组中。为了降低变异性，仅用于RARγ激动剂和HIF1α抑制作用（7 dpi），以及HIF1α遗传缺失实验。女性和男性在治疗组之间平均分布，用于PDPN+细胞消融研究，以及3个DPIHIF1α抑制实验。以前进行了成年（8至12周龄）小鼠的后皮肤全厚性伤口。简而言之，通过活检拳（Stiefel 10005）沿着背部的中线穿过皮肤折叠，进行双侧5毫米圆形伤口。对于夹板的型号47，立即进行弹性伤口，将圆形硅环粘合（Gracebio 664581）并在开放的伤口周围缝合。For the genetical lineage tracing of CD201+ fascia fibroblasts and Hif1αa gene deletion, Cd201creERR26Ai14, Cd201creERHif1afl/+, Cd201creERHif1afl/fl, and PdpncreERHif1afl/fl mice received three intraperitoneal injections of 2 mg（z）在受伤前两天，一天又一天，在受伤前的一天，一天和当天受伤。对于PDPN+促炎成纤维细胞的遗传谱系跟踪和消融，PDPNCREERR26MTG或PDPNCREERR26DTA小鼠每天接受腹膜内注射的每日腹膜内注射1 mg（z）-4-4-羟基氨基氧化氨基利液的每日延伸至0.1 mil-lly im by in 0.1 mil-ly 1 migly hight to in 0.1 mil-ly 1 migly to to to in 0.1 mig y1 i1 migly-ly122。对于Fascia矩阵命运图8,48，20μl 2 mg Ml-1太平洋蓝琥珀酰亚胺基酯（Invitrogen P10163），在盐水中均在盐水中皮下注入盐水中的0.1 M碳酸氢盐，在小鼠的背部三分和一天都注射到fascia Matrix之前的小鼠背部和一天。HIF1α抑制剂（Echinomycin，Sigma Aldrich SML0477），浓度为100μgkg -1体重， RARγ激动剂（BMS 961，Tocris 3410），浓度为100μgKg -1体重，或者在受伤后，每天受伤后，在受伤后紧接和下方会在伤口上近距离注射二甲基亚氧化二甲基亚氧化二甲基亚氧化二甲基亚氧化二甲基亚氧化二甲基（DMSO，Sigma Aldrich D5879）。

　　使用剪刀和镊子从安乐死的小鼠中解剖全下皮肤，并注意下方的筋膜保持完整。人类腹部皮肤是从慕尼黑技术大学（道德批准编号496/21-S-KH）的整形外科部门获得的，由于隐私问题，患者的细节仍然匿名。对于人和小鼠，将样品在冰冷的PBS（Thermo Fischer）中洗涤两次，以去除任何残留的碎屑，并放置在表皮侧面朝下的情况下。然后将软筋膜组织用镊子拉出，切成大约四毫米块，然后在PBS中洗涤。然后将筋膜外植体在6孔板中置于三孔板中，含有DMEM/F-12培养基，其中含有10％正常FBS，热灭活的FBS（生物对照，2-02F110-I；在56°C下热灭活30分钟），或0.5％的低血清浓度，1×GlutaMax（1×Glutosic 3555555555555555555003555550035555003555555003555555550035555555003555550025555555555555555555555555555enalicific 3550035003500355003500355003550035003500335555500350035 c青霉素/链霉素（Thermo Fisher Scientific 15140122）和1×MEM非必需氨基酸（Thermo Fisher Scientific 11140035）。媒体每隔一天改变一次。对于离体细胞消融3循环（在-80°C时1小时）和解冻（在环境温度下30分钟）进行培养前进行。对于治疗组，培养基补充了其他化合物，并在媒体变化过程中进行了刷新。所使用的化合物包括HIF1α抑制剂（0.1，10μM，棘霉素，Sigma Aldrich SML0477），RA（0.01和1μM，R＆D Systems 0695），泛弹性拮抗剂（0.01μm，agn193109，tocris 5758），0.01 Am58801。0760), RARβ agonist (0.01 μM, CD2314, Tocris 3824), RARγ agonist (0.01 μM, BMS 961, Tocris 3410), CYP26B1 inhibitor (0.01 μM, R115866, Sigma Aldrich SML2092), TGFβ1 (10 μM, recombinant mouseTGFβ1蛋白，研发系统7666-MB-005/cf）和TAZ激动剂（10μM，Kaempferol，R＆D Systems 3603/50）。对于联合处理，HIF1α抑制剂和RA的有效剂量为10和1μM， 分别。将样品维持在加湿的37°C，5％二氧化碳孵化器中，可容纳6（小鼠样品）或10天（人类样品）。通过用立体显微镜（Leica M50）进行每日成像评估筋膜组织收缩。

　　在含有0.4 mg ML-1胶原酶A（Sigma 10103586001）的消化溶液中，在37°C下在37°C下在37°C下解离和孵育1小时（SIGMA 10103586001），0.1 mg ml-1 Liberase tm（SIGMA），在37°C下，在37°C的37°C下解离和孵育1小时，将背侧筋膜与成年野生型小鼠的真皮进行手动分离。PBS中的40 U ML-1 DNase（Sigma D4263-5VL）。然后，将悬浮液通过70μm和40μm的筛子过滤。根据制造商的说明（Miltenyi 130-048-801和130-401和130-401），使用磁激活的细胞分选（MAC，MILTENYI，MILTENYI 130-106-585）进行CD201+成纤维细胞的纯化。CD201+成纤维细胞在相同环境条件下的筋膜外植体中培养在10％FBS的培养基中。所有实验均在第2和6段之间使用至少三组匹配的原始成纤维细胞线进行。对于处理，CD201+成纤维细胞在DMEM/F-12培养基中以2％热灭活FBS的DMEM/F-12培养基形成了6小时，然后再添加1 NG ML-1 NG ML-1 NG ML-1小鼠Interlebimbinant InterLebinant InterLebinant（R）（R）（R）（R）401-ML-005）或10 ng ML-1TGFβ1（R＆D Systems 7666-MB-005）与RA结合以增加浓度（0.1μM，1μM和5μM）。所有治疗均在低血清培养基（2％HIFB）中进行。治疗48小时后，根据制造商的说明，使用Qiagen rneasy套件（Qiagen 74104）提取RNA。用cDNA合成试剂盒（Life Technologies ab1453a）使用一微克RNA用于cDNA合成。使用SYBR Green PCR Master Mix（Thermo Fisher 4309155）进行定量PCR（QPCR）。每个样品一式三份运行，并最初标准化为家具基因GAPDH。使用ΔΔCT方法分析表达变化。使用的引物为：GAPDH（forward，5'-aggtcggtgtgtgtgtgtgaCggatttg-3';反向，5'-tgtagaccatgtagtgagggtca-3'），ccl2，forpersion forpersimActa2（正向，5'-GTCCCAGACACATCAGGGGAGGGAGTAA-3';反向， 5′-TCGGATACTTCAGCGTCAGGA-3′), Cxcl1 (reverse, 5′-ACTGCACCCAAACCGAAGTC-3′; forward, 5′-TGGGGACACCTTTTAGCATCTT-3′), and Pdpn (reverse, 5′-GTTTTGGGGAGCGTTTGGTTC-3′; forward,5'-cattaagccctcccagtagcac-3'）。

　　在相关的时间点上，将样品用4％多聚甲醛（PFA，VWR 43368.9 m）固定过夜，用新鲜的PBS洗涤三次，并在低温器中使用OCT（Callath KMA-0100-00A）进行冷冻处理（冷冻层NX70）。将切片用含有0.05％Tween-20（PBST）的PBS冲洗3次，并在室温下以10％的血清在PBST中阻塞1小时。然后，将它们与原代抗体在环境温度下或4°C下孵育3小时，过夜。然后将切片用PBST冲洗三次，并在环境温度下在阻塞溶液中与二抗孵育60分钟。最终，它们在PBST中冲洗了三次，并用荧光安装介质与4,6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI）进行了荧光安装介质。对于全安装染色，将固定的 - 法西亚碎片（约1 cm2）孵育在0.2％明胶（Sigma G1393），0.5％Triton X-100（Sigma X100）和0.01％的Thimerosal（Sigma T5125）中孵育24小时。然后，将它们与PBSGT中的原代抗体在环境温度下孵育48小时，然后在PBSGT中与物种相关的二抗孵育至少48 h或直到成像。Primary antibodies used: PDPN (Abcam ab11936, 1:500 dilution), pSTAT3 (Cell Signaling Technology 9145 S, 1:150), RUNX2 (Abcam ab92336, 1:150), GFP (Abcam ab13970, 1:500), PDGFRα (R&D systems AF1062, 1:100), KRT14 (AbcamAB181595，1：100），PECAM1（也称为CD31）（ABCAM AB56299，1：50），Lyve1（ABCAM AB14917，1：100），αSMA（ABCAM AB21027，1：150，1：150），YAP1（ABCAM ABCAM ABCAM AB2052270，1：1：100）HIF1A（Novus NB100-479，1：100），CCL2（ABCAM AB25124，1：100），CXCL1（R＆D Systems Mab453r，1：100），Aldh1a3（Novus NBP2-15339，1：100），1：100），CYP26B1（CYP26B1（ELABSCIERCE E-BABSCIERCE E-BAB-366），1：1：1：1：1：1：1：-abb-3661919191919191919199，，赛季，序列CD45/PTPRC（ABCAM AB23910，1：100）和PI16（R＆D Systems AF4929，1：100）。对于某些主要抗体（PSTAT3，RUNX2和HIF1A），使用柠檬酸盐缓冲液在80°C进行30分钟进行抗原检索， 在阻塞步骤之前，让它再冷却30分钟。使用了针对相应物种的Alexa Fluor488-，Alexa Fluor568-或Alexa Fluor647偶联的二抗（1：500稀释，生命技术）。按照制造商的建议，使用商业试剂盒（Sigma Aldrich HT15）进行了Masson的三色染色。使用Zeiss Axioimager在A中成像组织学切片。Z2M（Carl Zeiss）使用20倍物镜或雷霆成像器模型有机体（Leica）使用20倍的缩放。使用SP8多光子显微镜（Leica）对整个安装样品进行成像。

　　所有图像分析均使用斐济（V.1.53C）进行。为了评估体外体外和伤口闭合的组织收缩，使用“选择刷”工具选择了来自不同时间点的外植体或伤口区域，并使用“测量”功能进行测量。将面积值以100％为100％（第0天，A0）的百分比标准化。体外最终收缩（C）定义为培养后两天（第0-2天，AMAX）的最高面值之间的差异，减去培养的最后两天（第4-6天Amin）的最低面积值；因此，c = amax- amin。通过追踪沿（1）新表皮，（2）侧翼毛囊之间的距离覆盖（1）侧面毛囊之间的距离，并使用线测量工具来确定伤口长度作为平均长度从每个部分中的三个单个测量值中的平均长度确定为（1）新表皮，（2）侧翼毛囊之间的距离。对于细胞标记阳性量化，使用“下背景”功能（滚动= 20px），“中位数”（半径= 1），“ unsharp mask”（半径= 1，蒙版= 0.60），“ perseckle”，“增强的= 0.1 forments”（饱和的范围fors for pruity fors fors of prifaties forsoso），将单个通道进行预处理DAPI，PSTAT3，YAP1，PSMAD2，CD45和GFP信号），InterModes（Runx2，TDTomato，PDGFRα和Lyve1），Yen（CCL2），Isodata（pdpn）（PDPN）或肾素份（renyyrientropy（αSMA）。使用“选择笔刷”工具手动选择感兴趣的伤口区域（ROI），以作为表皮上的真皮下方的毛细血管和侧翼毛囊作为参考。使用DAPI通道测量了二进制图像的总伤口电池数（在ROI中），并使用该顺序使用功能“填充孔”，“流域”和“分析粒子”（尺寸= 70-1400px）。使用“ Image calculator_and”，两次，“闭合”，“填充孔”，“水孔”，使用标记的掩码使用标记掩码使用标记的掩码测量标记阳性细胞数 和“分析粒子”（尺寸= 70-1400px）功能。对于双标记阳性细胞计算，创建了两个标记通道的初始掩码，并像以前一样处理。对于伤口区域的量化，使用“选择刷”工具手动选择3个ROI。如前所述，对伤口的侧向限制进行了界定，上部伤口区域从伤口表面（3 dpi）或伤口表皮（7 dpi）垂直延伸200微米。筋膜的测量是在被破坏的肉芽杆菌肌肉向下延伸到背部肌肉的区域，而伤口核心覆盖了伤口筋膜和上部伤口之间的区域。从ROI中删除了非间质区域（例如毛囊和伤口表皮）。像以前一样对标记通道进行预处理，然后用“测量”函数对每个ROI的平均灰度（MGV）进行量化。为了视觉辅助，标记信号强度用“火”或“ 16彩色”伪色表示。通过使用RGB-to-CMYK插件将Masson染色的RGB图像转换为CMYK来确定ECM区域密度。然后，提取青色通道（ECM）并在预处理之前测量MGV。ECM密度定义为伤口覆盖总伤口区域的ECM（青色）区域。将伤口中的ECM密度和ECM MGV标准化至健康的邻近真皮，以避免染色切片之间的批处理作用。如前7进行分形分析。简而言之，像以前一样对青色通道进行了预处理，并使用“自动阈值”（“默认”方法）函数生成二进制图像。然后，使用与以前相同的设置对Fraclac插件分析二进制图像。使用基于Python的包装Matplotlib和Seaborn生成所有定量图。

　　如上所述，使用8毫米活检打孔（Stiefel 10008）收集皮肤和伤口。将组织排除，用剪刀切碎，并在消化溶液中孵育（0.2 mg – 1 mg ml-1 liberase，0.5 mg ml-1胶原酶A，在无血清DMEM中100 U ml-1 DNase）在37°C下在37°C下在350 rpm的摇动时孵育60分钟。用10 mL DMEM停止消化，将样品涡旋几秒钟，然后通过70μm的筛子进行张紧。为了分离骨髓细胞，剖析了小鼠的胫骨和股骨，并用带有G21针的注射器冲洗，然后通过40-μm滤光片过滤以去除组织碎片。用2％PFA固定单细胞悬浮液，以保持表面标记的稳定性长期。在分析之前，将单细胞悬浮液颗粒并悬浮在含有荧光团偶联抗体的PBS中30分钟。除CD45抗体外，所有抗体均在1：200的稀释度中使用，该抗体被稀释1：800。使用的抗体：CD45（也称为PTPRC）–APC和CD45 – PE/CY7（30-F11，Biolegend），CD31 – APC（390，e-Biosciences），TER119 – APC（TER119，TER119，BIOLEGGEND），CD326，CD326，CD326（也已知EPCAM）（也称为EPCAM）–EPCAM11 –FAF647（G8.AFENT-88，G8.88，AFENT-88，88，88）（M1/70，Biolegend），Ly6g – Pacblue（1A8，Biolegend），F4/80（也称为ADGRE1）–APC（BM8，BIOLEGEND），CD3 – PE/CY7（500A2，BIOLOLGEND，BIOLEGEND），BIOLEGEND），CD19 – BBV510（CD19 – BV510（6d5，biolegend），cd1140aPDGFRA）–PE-CY7（APA5，E-Biososciences）。所有样品均在配备紫色，蓝色和红色激光器的BD LSRII细胞图仪（BD生物科学）上运行，并在BD FACS Diva Analyzer Suite（BD Biosciences）中进行分析。对于所有细胞类型，都使用了从正向散射（FSC-A）与侧丝（SSC-A）图的初始门。由此，使用FSC-A与FSC-H图的单细胞门排除碎屑。对免疫细胞（CD45+）和基质细胞（LIN-：CD45 -CD31- TER119- EPCAM-）进行了严格的双线排除。将单核细胞和巨噬细胞门控为ADGRE1+，中性粒细胞为Ly6g+， T细胞为CD3+，B细胞为CD19+。同样，从lin-细胞中，然后从pDGFRA+以及CD31+，CD45+和EPCAM+细胞从LIN-细胞和CD201CREERR26AI14小鼠的TDTOMATO+细胞门控。使用补偿珠（Thermo Fisher 01-3333-42）对FMO对照进行信号补偿。

　　受伤后相关时间，从EN1CRER26MTMG背皮伤口中摄取了八毫米直径的伤口和周围皮肤。将来自三只小鼠的样品用于每个阶段（每个时间点六个伤口）。用外科手术剪刀将收集的组织切碎，并用补充25 U ML -1 DNase I（Sigma Aldrich d4263）的Liberase TM酶鸡尾酒消化60分钟。将所得的单细胞悬浮液过滤并在4°C下与不需要细胞型谱系的特定细胞标记物在4°C下孵育30分钟（稀释1：200）。Antibodies used: APC-anti-CD31 (eBioscience 17-0311-82), eFluor660-anti-Lyve1 (eBioscience 50-0443-82), APC-anti-Ter119 (Biolegend bld-116212), and APC-anti-CD45 (Biolegend Bld-103112).然后将细胞在4°C下洗涤并在4°C下孵育20分钟，并用合适的磁珠针对共轭氟载体和死细胞标记（死细胞去除套件，Miltenyi，Miltenyi 130-090-101）。使用的微粒：抗CY5/Alexa Fluor647（Miltenyi 130-090-855）和Anti-APC（Miltenyi 130-091-395）。根据制造商的指南，使用OCTOMAC和MS柱（myltenyi）分离细胞。然后在PBS中以0.04％BSA和300 U ML -1的RNase抑制剂（Ribolock Life Technologies EO0382）洗涤，每微氧化物100细胞洗涤，计数和稀释。仅使用> 90％活细胞的样品用于DropSeq分离。

　　遵循McCaroll实验室协议，使用基于DropSeq49微流体的方法将富含基质的细胞悬浮液分离，并进行了一些适应。简而言之，使用微流体PDMS设备（NanoShift），将细胞封装在带有条形码珠（每µL 120粒，Chemgenes Corporation，Wilmington，MA）的液滴中，速率为4,000 µL H -1。在用全氟 - 辛醇（Sigma-Aldrich）液滴破裂之前，将液滴乳液收集15分钟。断裂后，收集珠子，并将杂交mRNA转录本反转录（Maxima RT，Thermo Fisher）。通过添加核酸外切酶I（新英格兰Biolabs）去除未使用的底漆。然后用12个PCR循环（带有建议的设置）洗涤，对珠洗涤，计数并等分以进行预扩增（每反应2,000个珠子，等于每反应〜100个细胞）。将PCR产物汇总并用0.6×清洁珠（CleanNA）纯化两次。在标记之前，将cDNA样品加载在2100生物分析仪（Agilent）上的DNA高灵敏度芯片上，以确保转录本完整性，纯度和量。对于每个样品，来自估计的1,000个细胞的1 ng预扩增的cDNA由Nextera XT（Illumina）标记，并用自定义的P5引物（Integrated DNA Technologies）标记。使用0.2 nm变性样品和5％Phix Spike-In在Illumina hiseq4000上在100 bp配对的100 bp配对末端进行测序。对于第一次读取的启动，使用了0.5 µM read1custseqb（使用底漆序列：5'-GCCTGTCCGCGGAAGCAGCAGTGGTGGTGGTATATATATATATACGCAGAGAGAGTAC-3'）。STAR（2.5.2a版）用于映射读取，并将其与MM10基因组参考（由Drop -Seq Group，GSE63269提供），该参考量身定制为包括EGFP cDNA转录本。

　　所有分析均使用Phyton Toolkit Scanpy50和互补工具进行生态系统进行。将单个样品的矩阵连接，通过过滤细胞少于100个基因来检查质量。在少于50个细胞中出现的基因和数据集中总基因的0.5％的细胞也被过滤了。为了降低批处理和细胞周期效应，应按照开发商的建议使用战斗和细胞周期回归算法。UMAP算法用作首选尺寸还原方法。

　　通过增加数据集中定义的单元格群集，选择群集注释来选择迭代阈值。在整个鼠标数据集中，所使用的分辨率是仍然保存在单个群集中的所有表达PLP1细胞（Schwann细胞）的最高可能性。当群集成纤维细胞子集时，所使用的控制群集表达了肌纤维细胞。Louvain和Leiden聚类算法是补充的。使用“ Wilcoxon”方法计算每个群集的排名标记基因，并用于使用PantherDB Web工具进行术语统计过分代表测试。成纤维细胞超聚物是由经典泛纤维细胞标记（例如Col1a1和pDGFRA）的表达来定义的。使用先前报道的标记为8,17,51,52,53，使用“基因评分”功能计算皮肤成纤维细胞表达谱。乳头成纤维细胞标记包括：SPARC，NDUFA4L2，CLDN10，CPZ，COL3A1，CGREF1，COL16A1，MFAP4，MFAP4，CD63，MT1，FTH1，FTH1，CYP2F2，CCL19，CCL19，CCL19，PRDM1，PRDM1，LRIG1，LRIG1，LRIG1，LRIG1，EPHB2，TRPRERRA，TRPRERRRACasp1, Dennd2a, Ntn1, Sepp1 (also known as Selenop), Sipa1l2, Tfap2c, Axin2, Ctsc, Osr1, Cmtm3, Rgl1, Hrsp12 (also known as Rida), Moxd1, Itm2c, Steap1, Tnfrsf19, Cadm1, Efhd1, Ucp2,CREB3，CREB3L3，MXD4和APCDD1。Reticular fibroblast markers included: Gpx3, Cxcl12, Cygb, F3, Gsn, Dpt, Myoc, Tmeff2, Hmcn2, Krt19, Dact1, Fstl3, Map1b, Nexn, Gls, Fndc1, Vgll4, Arpc1b, Sulf1, Cdh2, Dbndd2, Tgm2, Fgf9,limch1，mgst1，npr3，sox11和vcam1。FASCIA成纤维细胞标记包括：PLAC8，ANXA3，AKR1C18，PLA1A，IFI27L2A，IFI205，IFI205，SFRP4，PRSS23，ACKR3，NOV（也称为CCN3），FAP，Rhoj，Rhoj，Rhoj，rhoj，klf9，klf9，sfrp2和tgfb2。对于肌成纤维细胞剖面，使用了poftn，acta2，p4ha1，p4ha2，p4ha3，col11a1，tnc，tnc，tagln，pdgfrb和vim。对于EPF的生物信息学“排序”，独立注释了EGFP转录本的原始计数值的子集的原始计数值超过0.5。

　　人体皮肤疾病数据集从GEO存储库中获得（GSE163973，GSE162183，GSE156326和GSE160536），并像以前一样合并并处理。使用Scarches54进行人类成纤维细胞簇的注释。简而言之，在参考数据集（鼠标）训练后，节点权重转移到了新模型。然后在训练有素的模型上测试了人类数据集，并相应地注释了细胞。根据围巾优化初始化了参数。

　　使用SCVELO TOOLKIT55,56，通过PAGA推断出来自所有成纤维细胞的小鼠轨迹以及来自RNA速度导向的边缘的PAGA，通过PAGA推断出来自所有成纤维细胞的小鼠轨迹。在标准设置下使用“动态建模”来计算速度。使用“速度伪度函数”函数在推断轨迹下排列细胞，该函数扎根于与其他簇的筋膜簇中最遥远的细胞中的轨迹起源。由于人类样品的不匹配，单位的性质，使用没有RNA速度的PAGA推断出人类轨迹（无偏见和from偏见到肌纤维细胞轨迹簇）。执行轨迹的ragragment，然后使用扩散假频率而不是速度伪度。

　　通过映射Riken数据库中1623个哺乳动物转录因子的表达，并在统计上相关（Pearson R）它们的表达与成纤维细胞态特征来进行调节分析。从转录因子列表中选择了程序，其表达式与已验证TransFac和编码数据库中下游目标的签名正相关。根据所选转录因子的表达，使用得分基因函数来计算单个程序得分。为了识别完整的规定，将每个程序的下游目标的组合列表映射并与程序分数相关。正相关的基因（其表达式匹配上游调节程序）使用基因分数函数和GO期限过度代表测试使用PantherDB57 Web工具进行了调节评分。

　　使用Dorothea Toolkit58推断转录因子活性。信号通路活性是通过从手动策划的列表中映射基因的表达来预测的。补充，使用后代工具58预测缺氧，Wnt和TGFβ途径活性，与我们的手动方法显示了TGFβ和Wnt信号活性相似的结果。通过将经过验证的HIF1α的下游靶标与后代的缺氧信号活性相关联，可以鉴定出在缺氧信号期间积极调节的HIF1α调节子。

　　使用Python Toolkit Scipy进行统计分析。没有使用方法来确定样本量。没有使用盲或随机化进行数据分析。两尾t检验，单向或双向方差分析和皮尔逊的R具有标准设置。P值低于0.05，并在图中指示的P值显着差异。在所有图中，误差线描述了标准偏差。

　　有关研究设计的更多信息可在与本文有关的自然投资组合报告摘要中获得。