AML是一种毁灭性的疾病，每年在美国和欧盟诊断出约44,000例新病例，而5年的生存率随患者的年龄和疾病的遗传特征差异很大。护理标准包括强化组合化疗，可以与同种异体茎和免疫细胞移植综合。对于不符合此选项的患者，靶向抑制剂（例如与Bcl-2抑制剂venetoclax2结合使用）用于特定的遗传亚组。然而，中位生存仍然只有8.5个月2,5,6,7。因此，对新型AML治疗的需求非常出色。

　　尽管具有遗传异质性，但AML的普遍特征是突出的分化阻滞，破坏了正常的髓样成熟并促进白血病细胞自我再生2,3。尽管分化停滞是临床表型的表现，但它也代表了可以用于治疗目的的AML脆弱性。与大多数通过细胞毒性消除爆炸的化学疗法不同，分化疗法旨在消除终末髓样成熟程序，从而降低白血病细胞的竞争性克隆优势3。一个值得注意的例子是急性寄生虫细胞白血病（APL），一种对标准细胞毒性疗法的AML亚型抗性3。在APL中，ATRA诱导白血病细胞分化8并导致暂时缓解9。但是，当与ATO结合使用时，通过降解PML -RARα融合蛋白并消除白血病干细胞（LSCS）10,11,12，通常在95％的病例中治疗治疗。这突出了追求联合疗法的重要性，以促进终止成熟的同时抑制自我恢复3,13。

　　为非APL AML开发分化疗法以达到APL治疗成功水平仍然是一个主要目标。在这方面，抑制染色质调节剂代表了一种诱导AML细胞成熟的新兴，有希望的方法。MENIN和DOT1L的抑制剂可以诱导MLL重新编重的AML的不同程度分化，而IDH1/2抑制剂也诱导分化，并且在IDH1/2-突变体AML14,15,16中非常有效。此外，由于组蛋白在AML发育和进展中的作用，组蛋白是AML治疗的潜在靶标17。特别是，组蛋白H3K4ME1/2脱甲基LSD1（参考文献18），其表达在AML中升高，对LSC维持和增殖至关重要19至关重要，并且已显示LSD1的抑制作用可诱导AML分化19,20。因此，在包括AML20在内的血液学恶性肿瘤的临床试验中，正在对LSD1的抑制剂进行积极研究。然而，仅通过LSD1抑制剂的治疗功效由于相关毒性而受到限制（NCT02177812）21,22。

　　为了增强LSD1抑制剂的毒性问题并减轻毒性问题，我们在诱导AML细胞分化23中筛选了与LSD1抑制剂GSK -LSD1的协同活性的小分子（扩展数据图1A，B）。使用生物活性分子的集合，我们在ER-HOXA9细胞中进行了筛选，这是小鼠骨髓模型，其中ER-HOXA9阻断了髓样分化并具有溶菌酶-GFP报告基因评估分化24（扩展数据图1A）。在筛选的化合物中，GSK3抑制剂LY2090314诱导成熟，结合低剂量的GSK – LSD1结合使用最合适（扩展数据图1C）。验证实验证实，50 nm GSK – LSD1与LY2090314相结合，可在5天内稳健增强溶菌酶– GFP的水平以及与分化相关的标记CD11b和GR-1的水平（图1A）。

　　GSK3介导转录共激活因子β-catenin（由CTNNB1编码）4的降解。在GSK3I上，稳定的β-catenin易位到核中，通常与转录因子TCF和LEF复合物，以激活Wnt途径目标25。Wnt途径与自我更新和肿瘤发生25有关。当GSK3负面调节WNT途径时，传统上并不是被认为是一种癌基因。但是，在某些AML亚型中，GSK3已通过积极调节细胞周期26和HOXA9 – MEIS1转录程序2​​7来具有致癌功能27。它的抑制作用诱导细胞周期停滞和分化，因此已被研究为潜在的癌症治疗靶标26,27,28。与GSK-LSD1不同，AML患者可以很好地耐受LY2090314的耐受性，并且具有强大的靶向活性（β-catenin水平增加了450％）29。然而，用LY2090314的单一治疗表现出所需的临床功效29。

　　To further test the efficacy of the GSK–LSD1 and LY2090314 drug combination (hereafter referred to as ‘combo’) in differentiation induction, we used orthogonal, functional readouts of myeloid maturation and found that combo treatment synergistically arrested proliferation, eliminated self-renewal as determined by colony formation assays and markedly induced a monocytic differentiation GFP reporter（图1B和扩展数据图1D，E）。值得注意的是，确实形成的组合处理的菌落显示出独特的散射体系结构，表明成熟（扩展数据图1E）。这些发现表明，组合诱导了ER-HOXA9细胞中的功能和生理骨髓分化程序。

　　为了评估人AML细胞系是否可以通过组合处理进行分化，我们检查了一个六个细胞系的突变多样的面板。在所有情况下，组合处理协同均降低了LY2090314剂量 - 反应曲线的一半 - 最大有效浓度（EC50），表现出强的协同作用（图1C和扩展数据图2A），并稳健地降低了结肠的形成能力（图1d）。为了进一步研究自我更新，我们用药物冲洗进行了连续菌落形成测定。收集，从药物处理的菌落的第一次镀膜中分离出来的细胞，串行清洗并播种，以在未经药物治疗的情况下进行另外两轮板。如果第一次播种后自我更新丢失，则应在不继续药物治疗的情况下保持其耗竭。实际上，在药物冲洗后，在组合处理的细胞中的第二和第三个板上不断且逐渐耗尽菌落形成能力，但在对照或单毒治疗的细胞中不断地填充（图1E）。最后，组合处理协同诱导所有细胞系中的CD11b高水平，并产生明显成熟的细胞（图1F和扩展数据图2B – D）。

　　为了研究白血病细胞组合治疗的选择性，我们在小鼠白血病细胞和正常的骨髓衍生的巨噬细胞中进行了剂量反应增殖分析。尽管RN2（MLL-AF9/NRASG12V）和HOXA9 – MEIS1过表达的AML细胞对组合处理表现出较高的敏感性，但即使在最高剂量下，骨髓衍生的巨噬细胞增殖也不会受到影响（图2A）。同样，组合处理对正常小鼠造血茎和富含祖细胞增强的lin-sca+ kit+（LSK）种群的克隆活性和分化也没有显着影响（图2B，C）。这表明药物组合治疗对白血病爆炸具有选择性，并且可能在体内耐受性。

　　由于有多种LSD1和GSK3抑制剂，我们接下来试图确认组合处理的功效不是GSK – LSD1和LY2090314所独有的。我们首先测试了Bomedemstat（IMG-7289），这是一种不可逆的LSD1抑制剂，用于髓样恶性肿瘤的临床试验和TAK-418（参考文献31）。像GSK-LSD1一样，Bomedemstat或TAK-418协同降低了THP-1细胞中LY2090314的增殖和诱导的CD11b（扩展数据图2E – H）。尽管已显示GSK – LSD1主要通过破坏重要的LSD1 – GFI1相互作用32,33,34，TAK-418主要抑制LSD1去甲基酶活性，而LSD1 – GFI1 Interaction31则主要抑制LSD1脱甲基酶活性。因此，这些数据表明，破坏LSD1 -GFI1相互作用或抑制LSD1催化活性都可以与GSK3I协同诱导AML细胞分化。接下来，我们测试了另一种GSK3抑制剂9-ENG-41的功效，该抑制剂目前也在临床试验中（NCT0367883）35。与LY2090314一样，低剂量的9-ING-41与IMG-7289协同，以停止增殖，克隆活性并显着诱导CD11b（图2D – F）。

　　接下来，我们进行了体内研究。我们使用了合成性HOXA9 – MEIS1逆转录病毒过表达模型，该模型概括了MLL-AML生物学的大部分，同时保留了具有显着的HOXA9和MEIS1 Attivation 24的非MLL-RERERRANGED AML类型的适用性。尽管仅GSK – LSD1和LY2093014对疾病的进展和生存具有适度的影响，但组合治疗提供了疾病进展的最大降低（图2G），并产生了显着的寿命扩展（图2H）。

　　接下来，我们想探讨组合处理诱导AML细胞分化的协同作用的分子机制是什么。为了解决这个问题，我们首先研究了药物治疗对ER-HOXA9细胞转录组和表观基因组的影响。正如预期的那样，经过5天的治疗后，对组合治疗的响应（n = 2,201）的差异表达比单独使用每种药物（GSK – LSD1的n = 772，而LY2093014的n = 772；补充表1）。原理成分分析（PCA）表明，组合处理诱导的染色质状态与单药治疗引起的不同状态遥远且与众不同（图3A）。基因集富集分析（GSEA）和聚类证实，组合处理协同上调了髓样分化表达特征和下调LSC特征（图3B – D和扩展数据图3A）。这些发现也在THP-1细胞中发现（扩展数据图3B – E和补充表2）。尽管LY2093014证明了其靶向抑制作用，但在Tyr279/216上的GSK3α/β/β自动磷酸化降低以及随后β-catenin水平的升高为36,37（图3F图3F），典型的WNT途径签名是弱的，如果在整体上均为993014，则含有COLSINIC wnt的签名。THP-1细胞（扩展数据图3G，H和数据未显示）。此外，在组合处理后，与β-catenin相互作用以激活规范Wnt途径靶基因的关键转录因子TCF1被下调（扩展数据图3i）。总的来说，这些结果提供了令人信服的证据，即组合处理诱导分化程序并损害LSC活性，并可能通过抑制WNT途径。

　　接下来，我们专注于在组合治疗后上调的基因。富集分析和手动检查表明，I型干扰素（IFN）信号通路中的基因明显过分代表性，包括STAT1，IRF9，IRF7和一个IFN刺激基因（ISG）小组，例如MX1，DDX58和OASL1，我们称为“ Synergy”（3）。这些结果也在THP-1细胞中发现（扩展数据图3J – L）。这表明，I型IFN途径中基因的激活可能会促进组合诱导的成熟，因为IRF家庭转录因子可以上调介导功能性粒细胞分化的抗菌反应成分的基因38。我们最近证明，LSD1I诱导双链RNA（DSRNA）和黑色素瘤中的IFN途径，刺激了抗肿瘤免疫39。同样，我们还观察到单独使用GSK – LSD1处理的AML细胞中DsRNA和IFNB1表达的水平升高，或与LY2090314结合使用（扩展数据图3K，M）。这表明LSD1在抑制dsRNA和IFN途径中的保守作用，并选择了实体瘤，并提供了GSK – LSD1的靶向作用的证据。

　　为了确定组合对染色质景观的影响，我们进行了atac-seq。我们发现，在任何处理下，全球染色质可及性似乎并未发生巨大变化，PCA再次表明，组合处理诱导了与单药治疗不同的较大的染色质状态变化（图3H）。尽管在药物治疗前已经在开放的染色质中富集了与分化相关的转录因子（例如ETS和ETV家族因子）的基序（扩展数据图3N和补充表4-6），但与单轴治疗相比，在Combo处理中，I型IFN途径基因的启动子在IFN途径基因的启动子上观察到了显着提高。值得注意的是，Wnt途径转录因子TCF和LEF的基序并未在任何处理中强烈富集（扩展数据图3N）。这些发现不是前所未有的，因为β-catenin可以与TCF1 – LEF1（例如HIF1α和IRF3）以外的转录因子相互作用（参考文献40,41）。例如，在表现出升高缺氧水平的结直肠癌细胞中，规范的β-catenin – TCF4信号传导途径被重定向到β-catenin –Hif1α信号通路40。此外，IRF3和β-catenin响应于合成DSRNA41，与IFNβ的启动子区域相互作用并共定位。

　　我们假设β-catenin和irf7可能形成一个关键的调节单位，该单元进一步驱动基于IFN治疗时诱导分化的基因，基于（1）IFN IFN途径调节元素的富集在开放式染色质中的富集，（2）IRF7上调节，（2）Respontionβ-cateNenIn inβ-cateNennIn中的稳定性。为了检验这一假设，我们在THP-1细胞中对β-catenin和irf7进行了切割和运行。如预期的那样，β-catenin仅在LY2093014和组合处理的细胞中显示染色质结合。在组合处理的细胞中几乎完全定位于启动子的IRF7峰值明显高于单药处理的细胞，并且在对照细胞中不存在（图4A-C和补充表7、8）。β-catenin和irf7在组合处理后与I型IFN途径和髓样分化有关的基因上的结合信号比单药治疗时具有更高的结合信号，这与组合诱导的基因在这些途径中的协同激活一致（图4D）。在LY2093014处理的细胞中，IRF7和β-catenin显示出中度共定位，其中3,555个IRF7峰和10,447个β-catenin峰具有780个重叠峰（22％IRF7峰的重叠峰（22％的IRF7峰和8％的β-catenin峰））。然而，组合处理导致β-catenin和irf7的共定位急剧增加，其中5,080个IRF7峰和15,367个β-catenin峰具有3,081个重叠峰（61％IRF7峰（占IRF7峰的61％）和20％的β-catenin峰；图4C和补充表9）。联合峰值峰主要定位于启动子，并富含调节髓样分化的转录因子的基序，例如PU.1，MYB和几个ETS家族因素（图4C，E和补充表10）。

　　在药物治疗时β-catenin和IRF7定位中发现的许多变化中，最值得注意的是它们在IFN反应的几个最关键驱动因素的启动子上的共同占领，例如STAT1和STAT2（例如，在组合），但不是单一试剂，但不是单一的治疗方法（图4F）。这种共定位与转录输出相关，因为这些基因通过组合处理协同上调（图4F和扩展数据图4A – C）。一致地，在另外两种AML细胞系OCI-AML3和MOLM-13中，我们观察到β-catenin和irf7在关键I型IFN基因的启动子上的强烈共同含量 - STAT1，IFIH1和STAT2 - 仅在用组合处理的细胞中（扩展数据图4D – G）。与LSD1作为H3K4ME1/2脱甲基酶的功能一致，抑制LSD1导致H3K4ME1水平的全球增加，因此在组合处理的细胞中，这种效果更为明显（图4B）。这与增强的染色质可及性（图3H – J）和组合处理后的基因表达增加有关（扩展数据图4H）。

　　STAT1的激活是IFN途径中的关键转录因子，与单核细胞分化和巨噬细胞的成熟有关42,43,44。这增加了组合可以通过激活关键IFN响应和分化促进基因（例如STAT1）来促进分化的可能性。为了检验这一假设，我们首先证实组合在所有测试的细胞系中协同激活的ISG（例如ISG15和MX1）（扩展数据图4A – C）。组合处理还协同上调了STAT1转录本，总STAT1蛋白和激活的磷酸化 - STAT1的表达（图4F和扩展数据图5A）。为了确定STAT1在介导组合诱导的分化中的重要性，我们用单个药物或组合处理处理了THP-1细胞，并传递了JAK1/JAK2抑制剂ruxolitinib，从而降低了STAT1的激活的磷酸含量-Y701形式（参考文献45）（Ref。45）（扩展数据图5A）。鲁唑替尼完全废除了ISG的诱导，表明组合驱动的IFN途径基因激活取决于STAT1激活（扩展数据图5B）。鲁唑替尼治疗还抑制了组合引起的CD11b的协同上调，细胞分化和增殖的损失（扩展数据图5C – E）。在MOLM-13细胞中也观察到了相似的结果（扩展数据图5F – H）。

　　为了确认这不是违反鲁唑替尼的脱靶作用，我们还遗传了CRISPR的STAT1，发现STAT1敲除苯甲酸治疗的所有方面（扩展数据图5i – L）。最后，表观基因组学的同居数据表明，IRF7和β-catenin可能会在关键调节剂（例如STAT1）的启动子上进行物理相互作用（图4F）。一致地，共免疫沉淀实验仅在组合处理后才显示β-catenin和IRF7之间的物理相互作用（扩展数据图5M）。总的来说，这些数据支持我们的模型，即组合处理不仅增强了I型IFN基因的表达，而且还触发了IRF7的激活和β-catenin的稳定性，它们在启动子（尤其是STAT1）的物理相互作用和共占量，尤其是STAT1，尤其是IFN型IFN型IFN的激活。

　　除了在IFN途径基因启动子上定位β-catenin外，我们还观察到启动子和偶尔在细胞周期调节剂的基因体上进行β-catenin和IRF7共定位，包括经典的β-catenin转录靶标，例如MYC（MYC）（扩展数据图5N）。实际上，对G2/M检查点基因，MYC基因集和E2F结合基序的共同结合的β-catenin和IRF7切割峰富含（扩展数据图5O，P和补充表11）。组合处理后，与共结合的β-catenin和IRF7具有共同结合的β-catenin和IRF7的细胞循环和相关基因几乎被普遍下调，这与组合处理对还原干性和促进分化的功能效应一致，并进一步表明β-catenin和irf7可能会在上下文中具有上下文特异性的转录抑制作用，从而贡献了副作用。

　　GSK3基因家族由两个相关激酶组成：GSK3α和GSK3β36,37。为了确定观察到的协同作用是针对GSK3α，GSK3β还是两者兼而有之，我们进行了短发夹RNA（SHRNA）敲低（扩展数据图6a）。与先前的研究36,37一致，编码GSK3β的基因敲低，但编码GSK3α的基因不导致β-catenin水平的升高，而GSK3α的耗竭导致AML细胞中等分化的AML细胞36,46（扩展数据的扩展数据）。随后，我们用抑制剂处理了GSK3α-敲低和GSK3β-敲低细胞。GSK3β敲低不会影响细胞增殖或分化（扩展数据图6E – G），而是β-catenin水平提高（扩展数据图6E），并与LSD1I协同作用，该LSD1I升高IRF7水平（扩展数据图6E – G）。相比之下，尽管编码GSK3α的基因的敲低导致中度分化，但它没有显示出与LSD1I的任何协同作用（扩展数据图6H – K），可能是因为它没有增加共激活剂β-catenin的水平（扩展数据图6H）。总而言之，GSK3I与LSD1I的协同作用主要由GSK3βI驱动，GSK3βI提高了β-catenin的水平，因此提供了一个共激活因子来与关键转录因子（例如IRF7）一起调节转录网络，以调节抑制干态和促进分化的转录网络。由于GSK3αI也适度促进了分化，因此其对PAN-GSK3I的抑制作用也可能有助于组合处理在诱导分化中的总体影响。

　　接下来，我们研究了组合对AML培养的离体患者的主要样品队列的影响。在检查其分化潜力的16个患者样品中，11个表现出比单独的抑制剂相比，对CD11b+细胞的增长超过五倍，对组合治疗的反应更强（图5A -C和补充表12）。在敏感样品中更常见于DNMT3A和NPM1中的MLL重排和突变，这与先前的发现MLL- leukaemia对LSD1I19高度敏感。在16个样本中，有5个没有显示出明显的响应。没有人有DNMT3A突变。总的来说，这些数据增加了DNMT3A突变在对组合处理的反应中可能具有重要作用的可能性。此外，这四个非反应患者样品中有两个具有TP53突变。先前已显示具有TP53突变的AML对LSD1I47具有抗性，这可能有助于它们对组合处理不敏感。

　　我们进一步研究了抑制剂对来自AML患者的另外12个主要样本的克隆生成潜力的影响，其中7例具有DNMT3A突变（图5D），而其他5个是DNMT3A野生型（WT；扩展数据；扩展数据图7A – C）。组合处理可显着抑制所有DNMT3A突变样品的克隆生成潜力，而不论次要突变如何（图5D）。除DNMT3A外，具有NPM1突变的样品似乎还响应组合处理（扩展数据图7a），而DNMT3A-WT和TP53突变样品似乎不敏感（扩展数据图7B，C）。组合处理的细胞也具有成熟粒细胞的形态特征（扩展数据图7D）。使用Bomedemstat和9-Eng-41的组合获得了相似的结果（图5E，F和扩展数据图7E）。与人类AML细胞系相似，在这些主要的人AML样品中，我们还发现LY2090314和组合处理稳定了β-catenin，组合强烈上调ISG表达（扩展数据图7F，G）。已经表明，具有DNMT3A突变的AML样品表现出较高的内源性追溯元素水平升高，并提高了Azacytidine48诱导的病毒模仿的敏感性。我们证实了在DNMT3A突变剂AML样品中重复元件和ISG的表达升高（扩展数据图7H，I），这表明已经升高的IFN途径的活性可能会使患者细胞对通过组合治疗诱导的进一步途径激活的反应能力敏感。与AML细胞系中的发现一致，鲁唑替尼还抑制了组合治疗在原代细胞中的影响（扩展数据图8a – H）。用相同浓度的抑制剂治疗对正常人造血细胞的菌落形成和分化没有影响（图5G和扩展数据图8i，J）。这表明组合治疗选择性地靶向白血病细胞对正常造血细胞的影响最小。

　　接下来，我们评估了在AML细胞系和DNMT3A突变和DNMT3A-WT患者衍生的异种移植物（PDXS）49,50,51的体内模型中组合治疗的治疗潜力。我们首先使用了OCI-AML3异种移植模型，该模型同时携带NPM1和DNMT3A突变，并用作DNMT3A-NPM1突变的AML的攻击性模型，其中末端疾病在移植后的3周内发展出来49。媒介物处理的小鼠迅速发展为末端白血病，中位生存期为26天（图5H）。但是，只有组合处理显着扩展了生存期（图5H）并减少了脾肿大（扩展数据图9A）。我们进一步评估了DNMT3A突变性白血病（AML-579）50,51的PDX模型中的组合。移植后13天开始治疗，持续了2周，在此期间未观察到明显的毒性或体重减轻（扩展数据图9B）。在轴承AML-579的小鼠中，组合处理可显着减轻肿瘤负担，如体内生物发光成像（扩展数据图9C，D），并显着提高了存活率，其中三分之三可以实现完全的白血病清除率（图5i）。相比之下，在DNMT3A-WT白血病的PDX模型中（AML-372），尽管LSD1I和组合处理都导致肿瘤负担的存活率略有增加和减少，但组合治疗并未显示出与LSD1I相比的其他额外好处（扩展数据图9E，F）。一致地，在组合处理的小鼠中未观察到没有明显的毒性或体重减轻（扩展数据图9G）。

　　为了验证组合处理在多细胞造血微环境中促进分化的有效性，我们使用了三维模型，可以更准确地模拟人骨骨髓组织环境52,53。与DNMT3A突变样品中DMSO处理的对照和单处理条件相比，组合处理显着增加了CD11b+细胞的种群（扩展数据图9H）。在DNMT3A-WT样品中，尽管组合处理导致CD11b+细胞的数量比对照组高，但单个处理LY2090314也导致了相似的响应（扩展数据图9H）。总而言之，多个AML模型的结果表明，所提出的组合治疗表现出显着的体内活性，这是通过降低的白血病生长和DNMT3A突变的异种移植模型的延长生存率证明的。在DNMT3A-WT样品中，尽管组合处理适度提高了生存率和诱导CD11b的表达，但其作用并不优于单药治疗。有必要进行进一步的研究，以研究我们如何通过将组合治疗与低甲基化剂相结合54,55,56的组合治疗方法，使DNMT3A-WT无反应的患者对组合治疗做出反应。

　　最后，我们根据药物组合协同签名的富集以及LSC的签名，I型IFN和WNT信号传导来调查我们的发现是否具有临床相关性。与我们的实验研究的预测一致，患者协同签名与I型IFN途径签名评分（r = 0.62; p <0.0001）的分数呈正相关，并且与LSC签名（r = -0.93; p <0.0001）和Wnt信号通路（r = -0.42; p <0.0001; p <0.0001; p <0.0001; p <0.0001）均与LSC签名密切相关。正如预期的那样，I型IFN途径得分也与LSC签名分数负相关（r = -0.65，p <0.0001；图5J）。由于DNMT3A突变患者对组合治疗的反应最有反应，因此我们还研究了OHSU队列中DNMT3A状态与协同分数之间的相关性。与患有DNMT3A-WT的患者相比，DNMT3A突变的患者更容易富集协同签名（扩展数据图10A，B）。最后，我们调查了协同签名是否具有预后价值，认为更大的爆炸成熟将对应于不太侵略性的疾病。实际上，比中位协同作用的患者的总生存率明显更长（图5K）。

　　组合处理可能正在积极抑制Wnt途径的可能性对AML以外的癌症产生了深刻的影响，而AML超出了由Canonical Wnt Signalling57驱动的。然而，由于内源性Wnt途径活性较低的事实，对Wnt途径相关的解释会导致ER-HOXA9和THP-1细胞的解释（扩展数据）。为了避免这种情况，我们生成了一条带有TCF/LEF报告的THP-1线，该线报告了Wnt Activity58。尽管记者在基础条件下未显示可检测的表达，但重组Wnt3a的添加强烈激活了记者的表达，这被组合处理抑制了（扩展数据图10c）。为了进一步确定组合处理是否可以抑制Wnt信号传导，我们使用了Wnt途径驱动的HCT116结直肠癌细胞系，带有TCF/LEF报告基因。组合处理不仅在基础条件下抑制了TCF报告基因，而且还积极抑制了重组WNT3A诱导的Wnt过度激活（扩展数据图10D）。在未来的实验中，确定是否可以在不同的WNT驱动的致癌环境中概括这种观察结果是显而易见的。