A，B，QPCR定量SLC25A51 HEK 293T（n = 3）（a）和HeLa细胞（n = 3）（b）表达shRNA靶向SLC25A51的SLC25A51 mRNA表达。C，D，NAD+分离的线粒体（n = 3）（c）和全细胞裂解物（n = 3）（d）的HELA细胞具有稳定的SLC25A51（KD）和非靶向对照（CTRL）的HELA细胞。E，蛋白质印迹确认靶向鼠slc25a51的shRNA降低了用编码SLC25A51-FLAG的cDNA转染的细胞中的SLC25A51蛋白表达。F，用线粒体CPVENUS NAD+生物传感器（n = 3）测量的小鼠胚胎干细胞中的线粒体无NAD+水平（SHF25A51和非靶向shRNA（SHFF2））（n = 3）。G，QPCR定量SLC25A51在用靶向SLC25A51的siRNA转染的HeLa细胞中的mRNA表达（n = 3）。H，蛋白质印迹证实了标记为标记的线粒体载体的蛋白质表达。控件包括稳定的NAD+生物传感器（传感器）和抗微管蛋白的表达。I，SLC25A51和SLC25A52亚细胞定位的免疫荧光检测。用编码FLAG-HA标记的SLC25A51或SLC25A52的cDNA瞬时转染细胞，并用抗FLAG和线粒体标记抗MTC02探测。比例尺：10μm，插图2μm。插图代表了标志定位和线粒体的变焦视图。J – L，HAP1 SLC25A51-KO（n = 8）（j），HEK 293T SLC25A51 SHRNNA-KNOCKDOWN（n = 8）（k），HELA SLC25A51 SHRNA-SHRNA-KNOCKDOWN细胞（n = 8）（n = 8）（L）及其相应的对照。通过电镀后，通过荧光DNA染料Cyquant（荧光DNA染料）测量增殖，并表示为折叠变化。M – O，SLC25A52在HAP1 SLC25A51-KO（M），HEK 293T SLC25A51 SHRNA-KNOCKDOWN（N）和HELA SLC25A51 SHRNA-SHRNA-KNOCKDOWN细胞（n = 3）（n = 3）（O）中的M – O，qPCR定量。P，来自HAP1野生型（WT）和SLC25A51敲除（KO）细胞的全细胞蛋白裂解物的蛋白质印迹，确认SLC25A51损失。负载控制是通过恢复700总蛋白质测量的总蛋白。Q，r， HAP1野生型和SLC25A51-KO细胞之间有所不同的前30个线粒体（Q）和全细胞代谢产物（R）的热图（n = 3）。数据表示为平均值±SEM。P值由使用Dunnett方法（针对三个或更多组的组）（三个组）进行多重比较分析，通过未配对的两尾学生的t检验（两组）或单向方差分析确定P值。*P <0.05，*** P <0.001 vs Control或WT（源数据中提供了精确的P值）。

　　源数据