从MSH血液库中获得了残留的EDTA期权血液标本，并按收集日期，位置和患者实践类别（OB/GYN访问，劳动和分娩；肿瘤学访问；手术和相关访问；心脏病学办公室或治疗访问；急诊就诊；以及其他相关住院医院）。为了以公正的方式选择样品，从每个集合每周的每个位置随机选择等离子体样品，然后将其等分用于测试。所有测试样品均登录到一个识别的数据库中，并匹配匿名患者识别符和经过验证的患者类别，此后，在一周内从同一患者获得的复制样本从进一步的分析中回顾性地删除。分析中包括来自同一患者的样本，如果它们收集至少7天。如果相距7天或更长时间，则可能发生血清转化，因此我们将少量标本视为人口的独立样本。收集始于截至2020年2月9日的本周。从每周的231到493个血浆样本（从2020年2月23日的一周开始）中，从常规护理患者的设置中选择了从常规的护理患者设置中进行OB/Gyn访问，劳动/分娩，交付，交付，肿瘤学访问，肿瘤学访问，手术以及相关访问以及心脏病学访问和其他常规访问的详细访问和其他常规数据（请参阅详细访问）（请参阅详细访问）（请参阅详细的详细访问）（请参阅详细的详细访问）（请参阅其他常规数据）（请参阅详细访问）（请参阅其他常规数据）。每周大约有200个血浆样品从住院队列中选择，由接受急诊科和其他相关医院入院的患者的血浆样本组成（紧急护理）。对于某些人，进行了病毒RNA的PCR测试以诊断SARS-COV-2的感染。

　　这项研究（协议HS 20-00308）由西奈山卫生系统机构审查委员会，西奈山伊坎医学院进行了审查，并确定不受卫生与公共服务部法规定义的人类研究的豁免（45 CFR 46. 104）。残留等离子体标本的收集和测试以盲目的方式进行，本研究中使用的所有数据均通过使用诚实经纪人的本地和报告法规匿名化。

　　如先前所述7,8，生成并表达了SARS-COV-2的重组RBD和尖峰蛋白。简而克隆到哺乳动物表达载体pCAGG中。还修改了尖峰蛋白的核苷酸序列以去除多重裂解位点，并引入了两个稳定突变（K986p和V987p）。表达式质粒可在BEI Resources存储库（https://www.beiresources.org/）上获得。

　　根据制造商的说明，使用Expifectamine 293转染试剂盒（Thermo Fisher）在Expi293F细胞（Thermo Fisher）中生产重组蛋白。未对支原体的验证验证和测试为阴性。使用Ni-NTA琼脂糖（Qiagen）通过重力流纯化蛋白质，并将其集中在Amicon离心单元（EMD Millipore）中。通过还原十二烷基硫酸盐 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）来分析纯化的蛋白质，并通过用RBD特异性单核抗体CR302218,19或2B3E5进行ELISA来确认正确的折叠。

　　在两步ELISA方案7,8之后，如前所述进行了血清学测定。The assay used here has a workflow that closely resembles an assay established in the Mount Sinai Health System CLIA-certified Clinical Pathology Laboratory, which received an FDA Emergency Use Authorization in April 2020. However, the assay used in this study was performed in a research laboratory setting with a sensitivity of 95% and a specificity of 100% (Extended Data Table 1), resulting in a positive predictive value of 1 (95% confidence interval,0.908–1.000）和0.97（95％置信区间，0.909–0.995）的负预测值。

　　在第一步中，使用重组RBD蛋白在高通量测定中筛选血浆样品。简而言之，将96孔微滴定板（Thermo Fisher）与50μl重组RBD蛋白涂覆，浓度为2μgml-1，在4°C下过夜。第二天，使用自动板垫圈（Biotek），用补充了0.1％Tween-20（PBS-T； Fisher Scientific）的磷酸盐缓冲盐水（PBS; Gibco）洗涤板3次。将板用200μl阻断溶液阻塞，该溶液由PBS-T组成，其中包括3％（w/v）奶粉（美国生物），并在室温下孵育1小时。作为一般的安全预防措施，将血浆样品在56°C下热灭活1小时。将阻塞溶液从板上取下，并在含有1％（w/v）牛奶粉末的PBS-T中稀释的100μl等离子体样品被稀释到微滴板的各个井中。2小时后，将板用PBS-T和50μl抗人IgG（Fab特异性）辣根过氧化物酶抗体（在山羊中产生； Sigma，A0293）在PBS-T中稀释1：3,000，将含1％牛奶的PBS-T稀释到所有孔中，并在室温下孵育1 H。将微量定板用PBS-T和100μlSigmafast O-苯基二胺二氢氯化物（Sigma）洗涤3次。10分钟后用50μl每孔3 m盐酸（Thermo Fisher）停止反应，并用板读取器（Biotek）以490 nm的波长读取板。在490 nm（OD490）截止值0.15时超过光密度的血浆样品被归类为假定阳性，并使用全长的重组尖峰蛋白在确认性ELISAS中进行了第二步。

　　为了执行确认性ELISA，将板覆盖并阻塞如上所述，除了在2μgml-1浓度下全长的峰值蛋白添加到板上。1小时后，除去阻断溶液，将其推定的正等离子体样品在添加在PBS-T中制备的1％牛奶中连续稀释的推定阳性血浆样品，并在室温下孵育2小时。如上所述，进行其余的测定法。在Microsoft Excel和GraphPad Prism 7中分析了数据。将截止值设置为OD490值为0.15，将真实阳性样品定义为在1:80等离子体稀释下超过OD490值的样品。在信号下降到0.15的OD490以下之前，计算并定义为最后一个稀释的端点滴度。对于在最后稀释时超过0.15的OD490的样品（对于截至3月29日和4月5日止几周的样本1：12,800；截至4月12日和5月24日的几周的样本），四个参数曲线曲线拟合（可变坡度），并应用了终点滴滴滴滴滴滴。

　　使用40名患者的血清和/或血浆样本确定测定的敏感性和特异性，这些患者患有PCR固定的SARS-COV-2感染（真实阳性）和74个阴性控制样品（56个负面样品（56个样品，这些样品是在Pandemic和18个样品之前没有确认的SARS-COV-2未经确认的SARS-COV-2感染；考虑到面板中真实阳性和真实负面因素的比率（35％的血清阳性），确定了阳性和预测值。值得注意的是，使用使用面板确定的100％特异性，并假设测试组中的较低（例如1％）真实血清阳性不会改变阳性预测值。

　　假设基于Wilson -Brown20的方法，计算了血清阳性的95％置信区间。使用Mann-Whitney U检验确定了紧急护理和常规护理组之间终点滴度的显着差异。使用Wilson和Brown的方法确定了测定敏感性，特异性和阳性预测值和阴性预测值的95％置信区间。

　　有关研究设计的更多信息可在与本文有关的自然研究报告摘要中获得。