实验不是随机的，只有病理学家在实验和结果评估过程中对小组治疗视而不见。

　　在评估和认证实验室动物护理（AAAALAC）认可的机构的评估和认证协会中，恒河猴和cynomolgus猕猴进行了治疗。研究方案和所有兽医程序均由与杜克IACUC的理解备忘录批准，并根据标准操作程序进行。根据NIH的原则，研究了所研究的猕猴在AAAALAC认可的机构中进行了容纳并维护。所有研究均严格遵守《 NIH在生物试验》中的护理和使用指南中的建议。Bioqual已获得AAAALAC和OLAW的完全认可，并保证A-3086。根据Weatherall报告“在研究中使用非人类灵长类动物”的建议，所有与这项工作相关的物理程序都是在麻醉下进行的，以最大程度地减少疼痛和困扰。Teklad5038 Premimate Diet每天每天通过猕猴的大小和体重提供一次。饮食中添加了新鲜的水果和蔬菜。随意给淡水。所有猕猴均根据《实验动物的护理和使用指南》进行。如先前所述的51,52，制备mRNA-LNP。用50μg的RBD mRNA-LNP对恒河猕猴（n = 8猕猴）进行免疫两次。用50μg的S-2P mRNA-LNP（编码用K986P和V987P突变稳定的跨膜尖峰蛋白）将cernomolgus猕猴（n = 5猕猴）用50μg的S-2P mRNA-LNP免疫，并用100μg的RBD – SCNP辅助辅助3-222222222222222222。PBS中的μg明矾。另一组cynomolgus猕猴（n = 5猕猴） 用左右股四头肌免疫，用100μg的RBD – SCNP佐剂，用5μg的3M-052水配方在PBS31中与500μg校友混合。免疫的混合物由250μl的RBD – SCNP与250μl的0.02 mg ML-1 3M-052和2 mg ML-1校友混合。选择组大小以使统计显着性可以通过组非参数统计比较之间达到。没有其他统计方法用于预先确定样本量。猕猴平均8到9岁，体重为2.75至8公斤。允许可用性时，每组男性和女性猕猴会保持平衡。研究没有盲目进行。在免疫后，期间和之后，对猕猴进行了猕猴的评估。在所研究的猕猴中，在整个免疫方案中获得了完全的血液计数和化学作用，并且没有注意到明显的异常。在10个膀胱猕猴中，没有报告注射部位的不良事件。在研究过程中，两个cynomolgus猕猴会轻微减轻体重。两个cynomolgus猕猴显示食欲不振的单一发生率，在整个研究过程中，另外一个囊肿的食欲不足。此外，一个猕猴呈现了感染的淋巴结活检部位，该部位对适当的兽医治疗做出了反应。如前所述15，在挑战之前收集了生物测量，在挑战后的2和4天收集了生物测量。通过知情同意，获得人类样本。所有使用人类样本的招聘，样本收集和实验程序均已获得杜克机构审查委员会的批准。

　　所有猕猴在第11周（上次疫苗接种后3周）都通过气管内（3.0 mL）和鼻内（每鼻孔0.5 ml）接种（0.5 mL）接种，并具有105个斑块形成单位（PFU）的SARS-COV-2（2019-NCOV/USA-WA1/2020）。该库存是从BEI Resources（NR-52281）的P4种子库存中生成生物标志（批次NO.030120-1030，3.31×105 PFU ML-1）。该库存进行了深度测序，以确认与WA1/2020分离株的同源性。使用前将病毒保存在-80°C下，用手融化并立即放在湿冰上。在PBS中将库存稀释至2.5×104 PFU ML -1，并在接种前轻轻涡旋5 s。鼻拭子，BAL，血浆和血清样品在七天前，两天和四天后收集。未免疫的对照cernomolgus猕猴（n = 5）包含猕猴，其中注入了10 mg kg-kg-1的对照抗体（CH65），然后在3天后以RBD – SCNP-SCNP-SCNP-SCNP-SCOV-2的相同挑战剂量和SARS-COV-2的质疑提出质疑。猕猴。通过SARS-COV-2亚基因组E和更敏感的N RNA（E或N SGRNA）39在“ SGRNA实时PCR量化”中所述的SARS-COV-2亚基因组E和更敏感的N RNA（E或N SGRNA）的保护确定。

　　合成冠状病毒外生域DNA构建体（Genscript），如先前所述53。S-2P通过在氨基酸位置986和987的引入2个脯氨酸来稳定。编码S-2P和Hexapro54的质粒使用Turbo293（SpeepBiosystems）或293fectin（Thermofisher）在Freestyle 293细胞（Thermo Fisher）中瞬时转染。每月对所有细胞进行支原体测试。这些构建体包含HRV 3C可转换的C末端Twinstreptagii-8×Hist。在第6天，通过离心培养物并通过0.8μm滤光片过滤产生无细胞培养的上清液。蛋白质通过链霉菌树脂（IBA）从过滤的细胞培养上清液中纯化，并使用Superose 6柱（GE Healthcare）在10 mM Tris pH8,150 mm NaCl或2 mm Tris pH 8，200 mm NaCl中使用Superose 6柱（GE Healthcare）纯化蛋白质。ACE2-FC通过自由泳293-F细胞的瞬时转染53表示。通过HITRAP蛋白A柱色谱法和SuperDex200尺寸 - 排斥色谱法从细胞培养上清液中纯化ACE2-FC在10 mM Tris PH8,150 mm NaCl中纯化。如先前所述55。合成SARS-COV-2融合肽（Genscript）。

　　Wuhan菌株SARS-COV-2 RBD用分子酶A供体序列LPETGG在其C末端编码。分类酶的C端是供体序列的hRV-3C裂解位点，他的标签8倍和双链球菌（IBA）。SARS-COV-2 RBD在自由泳293个细胞中表达，并通过“ SARS-COV-2蛋白质产生”中所述，通过链霉素亲和力色谱（IBA）和SuperDex200尺寸 - 排斥色谱法纯化。幽门螺杆菌铁蛋白颗粒用五甘氨酸排序酶表达在每个亚基的N末端编码的受体序列。为了对铁蛋白颗粒的亲和力纯化，将6倍的标签添加到HRV3C切割位点上。具有分子酶A N末端标签的铁蛋白颗粒被缓冲液交换为50 mM Tris，150 mM NACI，5 mM CaCl2，pH 7.5。然后，将180μmSARS-COV-2 RBD与120μm的铁蛋白亚基混合，并在室温下与100μm排序酶A孵育过夜。孵育后，使用Superose6 16/60色谱柱从游离铁蛋白或自由RBD中分离出共轭颗粒。

　　使用八个（Fortebio）测量结合。在PBS中，将抗人类IgG捕获（AHC）传感器尖端（Forte Bio）至少水化10分钟。在PBS中将ACE2和单克隆抗体稀释至20μgml-1，并放入黑色96孔测定板中。流感抗体CH65用作背景参考抗体。将RBD纳米颗粒稀释至PBS中的50μgml -1，并添加到测定板中。传感器尖端用抗体加载120 s。随后，将传感器尖端在PBS中洗涤60 s，以去除未结合的抗体。将传感器尖端孵育在新鲜的PBS孔中，以建立基线读数，然后再浸入RBD – SCNP，以允许关联400 s。为了测量抗体-RBD -SCNP复合物的解离，将尖端在PBS中孵育600 s。解离结束时，将尖端弹出，并连接一个新的尖端以加载另一种抗体。通过数据分析HT V.12（Fortebio）分析数据。从所有值中减去与CH65观察到的背景结合。所有结合曲线都与关联开始。在GraphPad Prism v.9.0中绘制了400-S关联阶段结束时的结合响应。

　　使用BIACORE S200仪器（Cytiva），在HBS-EP+运行缓冲液中进行了与单体SARS-COV-2 RBD蛋白结合DH1047抗原结合片段（FAB）的表面等离子体共振测量。在DHVI BIA核心设施中进行测定。RBD首先是通过其双链球菌捕获到系列S链霉亲和素芯片上的300-400个共振单元的水平。使用单个循环动力学注射模式以50μlmin -1的流速，在捕获的尖峰蛋白上以0.5至500 nm的抗体在0.5至500 nm处注射抗体。晶圆厂的关联发生180 s，然后在关联阶段结束后解离360 s。在解离阶段结束时，将RBD重生为30 s的甘氨酸pH 1.5。使用Biacore S200评估软件（Cytiva）分析结合值。参考文献包括空白链霉亲和素表面以及空白的缓冲液结合，并从DH1047值中减去，以说明信号漂移和非特异性蛋白质结合。使用局部RMAX的1：1 Langmuir模型用于曲线拟合。结合速率和常数源自曲线。显示了两个独立实验的代表性结果。

　　如前所述56，SARS-COV-2斑块测定在杜克区域生物园区生物疗法生物抗体3（BSL3）实验室中进行。56。将BAL液的系列稀释与标准斑块测定中的Vero E6细胞一起孵育57,58。将BAL和细胞在37°C和5％二氧化碳中孵育1小时。在孵育结束时，将1 ml的粘性覆盖层（1：1 2×DMEM和1.2％甲基纤维素）加入每个孔中。将板孵育四天。固定后，染色和洗涤后，将板干燥，并计算每种稀释的BAL样品中的斑块。数据报告为BAL流体的PFU ML -1。从六个未免疫的SARS-COV-2挑战猕猴中收集样品，以与接种疫苗接种的猕猴进行比较。

　　对于SARS-COV-2（D614G）和SARS-COV-2 B.1.1.7伪病毒中和测定，SARS-COV-2峰值峰值病毒的中和通过适应先前描述的感染测定，该感染测定于293T/ace2.M.M.Farzan和hhs.mm.Farz和hhs.M.M.Farz。将细胞保持在含有10％FBS和50μgml -1庆大霉素的DMEM中。国立卫生研究院疫苗研究中心的B. Graham和K. Corbett提供了编码编码密码子优化的全长尖峰（VRC7480）的表达质粒。D614G的取代是通过位于位置的诱变引入VRC7480中的，该诱变使用Agilent Technologies的Quikchange Lightning位置定向的诱变试剂盒（210518）。通过全长尖峰基因测序证实了该突变。使用Fugene 6（Promega，E2692）转染HEK 293T/17细胞（ATCC，CRL-11268），产生假病。通过与慢病毒主链（PCMVΔR8.2）和萤火虫荧光素酶报告基因（PHR'CMV LUC）共转染产生了表达ACE2 293T细胞感染的假病。通过低速离心和过滤（0.45-μm滤波器）阐明细胞的培养上清液，并在-80°C下储存在1 ml等分试样中。

　　为了在表达ACE2的293T细胞中进行中和测定，将假定剂量的病毒与8个连续三倍或五倍的单克隆抗体的稀释型在37°C的总体积150μl中，在150μl中，在96孔扁平扁平扁平的扁平底层培养基培养基（Corning Bining Bining corutiantains）中（37°C）。SARS-COV-2 RBD中和抗体DH1043峰于正常的人血清被用作阳性对照。使用Tryple Express酶溶液（Thermo Fisher Scientific）悬浮细胞，并立即添加到所有井中（每孔100μl生长培养基中的10,000个细胞）。一组八个对照井接收的细胞 +病毒（病毒对照）和另一组八个井仅接收的细胞（背景对照）。孵育66-72小时后，通过温和抽吸去除去培养基，并将30μl的Promega 1×裂解缓冲液添加到所有井中。在室温下孵育10分钟后，将100μl的明亮GLO荧光素酶试剂添加到所有井中。1-2分钟后，将110μl的细胞裂解物转移到黑色/白板（Perkin-Elmer）中。使用Perkinelmer Life Sciences，Model Victor2发光计测量发光。

　　为了使WA-1，p.1和b.1.351 SARS-COV-2伪病毒，通过Genscript合成了各种菌株的SARS-COV-2尖峰糖蛋白的人类密码子优化的cDNA，并通过Genscript合成，并将BAMHI和XHOI位点之间的真核生物细胞表达vector vector vector vector vector vector vector vector pcdna合成。通过将Lenti-X 293T细胞与PSPAX2（GAG/POL），PTRIP-LUC慢病毒载体和PCDNA 3.1 SARS-COV-2-SPIKE-DELTAC19共转染，使用Lipofectamine 3000收集到48 h和过滤器。表达ACE2和TMPRSS2蛋白（293-ACE2-TMPRSS2细胞）的HEK293T细胞。

　　For the neutralization assay, 50 μl of SARS-CoV-2 spike pseudovirions were pre-incubated with an equal volume of medium containing serum at varying dilutions at room temperature for 1 h, then virus-antibody mixtures were added to 293T cells expressing ACE2 (WA-1 and B.1.351 assays) or 293-ACE2-TMPRSS2 (WA-1 and P.1 assays) cells in a96孔板。孵育3小时后，将接种物用新鲜培养基代替。24小时后将细胞裂解，并使用荧光素测量荧光素酶活性。对照包括仅细胞对照，没有任何抗体控制的病毒和阳性对照血清。中和滴度是血清稀释（ID50或ID80），在该病毒对照井后，相对发光单元（RLU）分别将相对发光单元（RLU）降低了50％或80％。

　　全长SARS-COV-2，SARS-COV，WIV-1和RSSHC014病毒旨在表达纳米酸酯酶（NLUC），并通过反向遗传学回收，如前所述60,61,62。在PFU ML-1定义的Vero E6 Usamriid细胞中测量病毒滴度，在四翼生物学复制中以6孔板格式以准确性为单位。对于96孔中和测定法，将Vero E6 Usamrid细胞以前一天的孔中的20,000个细胞铺在透明的黑色壁板中。检查细胞以确保测定当天的汇合。在1:20的起始稀释下测试血清样品，并连续稀释三倍，直至9稀释斑。将连续稀释的血清样品与稀释的病毒相等地混合。然后将抗体 - 病毒和仅病毒混合物在37°C与5％CO2孵育1小时。孵育后，在37°C下以5％CO2在75 PFU的75 PFU中添加了连续稀释的血清和仅病毒对照。24小时后，将细胞裂解，并根据制造商的规格通过纳米-GLO荧光素酶测定系统（Promega）测量荧光素酶活性。通过Spectramax M3读板（分子设备）测量发光。病毒中和滴度定义为样品稀释，相对于病毒对照井的平均值观察到RLU降低了50％。从WIV-1中和滴度中减去了预言或无免疫的对照猕猴值，但所有其他病毒均未获得背景。

　　所有工作均在BSL3设施中使用批准的SARS-COV-2标准操作程序进行，该设施符合微生物和生物医学实验室中建议的要求，美国卫生与公共服务部，美国公共卫生服务部以及美国疾病控制与预防中心以及NIH。

　　对于ACE2阻断测定，将板涂在2μgml -1重组ACE2蛋白上，然后在1×PBS中用3％BSA洗涤并阻止。尽管测定板被阻塞，但纯化的抗体被稀释，如“血浆和粘膜IgG ELISA结合测定”中所述，仅在1％BSA中，二含0.05％Tween-20。在一个单独的稀释板中，将S-2P与抗体混合，最终浓度等于尖峰与ACE2蛋白结合的半极有效浓度。使混合物在室温下孵育1小时。然后洗涤阻塞的测定板，并在室温下将抗体 - 尖头混合物添加到测定板中1小时。洗涤板，并与同一尖峰蛋白（自由泳293-F细胞表达的S-2P）进行多克隆兔血清1小时，用山羊抗兔-HRP（ABCAM，ABCAM，AB97080）进行清洗并检测到TMB底物。通过比较仅无抗体的抗体的OD与含有尖峰蛋白的样品的OD，确定了抗体能够阻断峰值蛋白与ACE2的结合的程度。使用以下公式来计算阻塞的百分比：阻止％=（100 - （仅峰值的OD样品/OD）×100）。

　　如“血浆和粘膜IgG阻断ACE2结合”中所述，对DH1041和DH1047进行阻塞测定，除了板上用DH1041或DH1047而不是ACE2涂上板。

　　对于冠状病毒峰值抗体的ELISA结合测定，抗原面板包括SARS-COV-2 SPIKE S1 + S2 ECD（SINO，40589-V08B1），SARS-COV-2 S-2P53，SARS-COV-2 S-2P53，SARS-COV-2 SPIKE-2 SPIKE-RBD来自乳Mammalian Cell 293（SINO 293（SINO），40592--V08H）SARS-CoV-2 fusion peptide (FP), SARS-CoV spike protein delta (BEI, NR-722), SARS-CoV WH20 spike RBD (SINO, 40150-V08B2), SARS-CoV RBD, MERS-CoV spike S1 + S2 (SINO, 40069-V08B), pangolin GXP4L S-2P, BatCOV-RATG13 S-2P和BAT COV-SHC014 S-2P。

　　对于结合ELISA，将384孔ELISA板与0.1 M碳酸氢钠在4°C的0.1 M碳酸氢钠中涂有2μgml-1的抗原。用PBS + 0.05％TWEEN 20洗涤板，并用稀释剂（含4％（w/v）乳清蛋白的PBS，15％的正常山羊血清，0.5％Tween-20-20和0.05％硫唑钠）在室温1 h上堵塞。从1:30稀释开始，将血浆或粘膜液在超块中连续稀释三倍。鼻液是从纯净开始的，并稀释了1:30，而BAL液的浓度为十倍。为了浓缩BAL，将来自同一猕猴和同一时间点的单个BAL等分试样在3 kDA MWCO超滤管中合并（sartorious，vs2091）。通过以3500 rpm离心30分钟或直到体积减少10倍，将合并的BAL浓缩。然后将池等分等分并在-80°C下冷冻直至用于测定。将纯化的单克隆抗体样品稀释至100μgml -1，然后在测定稀释液中连续稀释三倍。将样品添加到抗原涂层的板上，并孵育1小时，然后用PBS-0.1％Tween 20. HRP偶联的山羊抗人IgG二抗或小鼠抗逆转抗体IgG IgG二级抗体（Southernbiotech，SouthernBiotech，2040-05）稀释至1：10,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000年，将这些板洗涤四次，并用四甲基苯胺底物（Sureblue Reserve-KPL）开发。用1 M HCl停止反应，并确定450 nm的OD。

　　SARS-COV-2 E基因和N基因亚基因组mRNA通过一步RT – QPCR测量，该QPCR适用于先前描述的方法63、64。E和N基因被克隆到pcDNA3.1中，并用作体外转录模板。使用Megascript T7转录试剂盒（Thermofisher，AM1334）生成体外转录RNA，并使用Megaclear转录清洁套件（Thermofisher，AM1908）纯化。量化纯RNA并将其用作qPCR的标准。RNA extracted from animal samples was quantified using TaqMan Fast Virus 1-Step Master Mix (ThermoFisher, 4444432) and custom primers and probes targeting the E gene sgRNA (forward primer, 5′-CGATCTCTTGTAGATCTGTTCTCE-3′; reverse primer, 5′-ATATTGCAGCAGTACGCACACA-3′;probe, 5′-FAM-ACACTAGCCATCCTTACTGCGCTTCG-BHQ1-3′) or the N gene sgRNA (forward primer, 5′-CGATCTCTTGTAGATCTGTTCTC-3′; reverse primer, 5′-GGTGAACCAAGACGCAGTAT-3′; probe, 5′-FAM-TAACCAGAATGGAGAACGCAGTGGG-BHQ1-3'）。QuantStudio 3实时PCR系统（Applied Biosystems）或SteponePlus实时PCR系统（Applied Biosystems）用于实时PCR反应。周期条件如下：在50°C下逆转录5分钟，在95°C下初始变性20 s，在95°C下在95°C下的变性 - 通量延伸15 s和60°C 30 s。标准曲线用于计算每毫升拷贝的E或N sgrna。E和N SGRNA分析的LOD为每反应的12.5份，或每毫升BAL，鼻拭子或鼻腔清洗的150份。

　　在转染当天，将EXPI293-F细胞稀释至每毫升2.5×106个细胞。用外射线胺和重链和轻链表达质粒共转染细胞。转染后16小时添加增强剂。在第5天，通过离心清除细胞培养，过滤并与蛋白A珠一起过夜。第二天，将蛋白质A树脂用Tris缓冲盐水洗涤，然后添加到25毫升柱中。再次洗涤树脂，然后使用冰川酸从蛋白A树脂中洗脱抗体。用1 M Tris pH 8中和该溶液的pH。将缓冲液换成25 mm柠檬酸钠pH 6，其中补充了150 mm NaCl，0.2-μm滤波并在-80°C冷冻。

　　在约1-5 mg ml-1浓度下，RBD纳米颗粒蛋白的浓度已被闪烁并储存在-80°C下，在37°C的铝块中融化5分钟；然后将1–4μl的RBD纳米颗粒稀释至0.1 mg ml-1的终浓度，为含有150 mM NaCl，20 mM HEPES pH 7.4、5％甘油和7.5 mM glu​​tar醛的室温缓冲液。交联5分钟后，通过添加足够的1 M TRIS pH 7.4库存来淬灭多余的戊二醛，使最终浓度为75 mm Tris并孵育5分钟。对于负染色，将碳涂层的网格（EMS，CF300-Cu-ul）在15 mA处发光20 s，然后在10-15 s上在网格上孵育5μl的淬灭样品，并用2％的紫酸甲酸甲酸盐染色，然后染色。空气干燥后，用飞利浦EM420电子显微镜以120 kV的速度成像，以82,000×放大倍数成像，并用2K×2K CCD摄像头捕获的图像，像素大小为4.02Å。

　　Relion 3.0程序用于所有负污渍图像处理。进口图像，用CTFFIND校正了CTF，并使用单独的纳米颗粒平均值中的纳米颗粒模板挑选了颗粒。将提取的粒子堆栈进行2或3轮2类平均和选择，以丢弃垃圾粒子和背景选择。

　　使用R中的ComplectHeatMap封装计算了氨基酸序列相似性的热图。简而言之，从NCBI GenBank中检索了1,408个Betacoronaverus序列，并与Wuhan-1 Spike蛋白序列对齐，并将其转移到与位置的区域。然后使用usearch65群集，序列身份阈值为0.90，从而群集群群聚类，从而产生52个簇。我们从每个群集中采样一个序列，以生成一组代表性的序列。添加了群集集中不包括的五个betacoronavirus序列：SARS-COV-2，GXP4L，BAT冠状病毒Ratg13，Bat冠状病毒SHC014和BAT冠状病毒WIV-1。这导致了一组57个代表性的尖峰序列。使用全局比对和Blosum62评分矩阵对齐成对的尖峰氨基酸序列。对于RBD和NTD结构域的比对，将尖峰序列比对与Wuhan-1尖峰蛋白RBD区域（残基330-521）和NTD区域（残基27-292）进行比对，并将其修剪为对齐区域。使用邻居加入方法和默认参数，使用Geneious Prime 2020.1.2使用RBD序列的系统发育树结构。为了将betacoronavirus序列保守映射到RBD结构上，从GenBank检索了组-2B峰值序列，并使用USEARCH65群集以0.99的序列身份阈值聚类，从而产生39个集群。对于大小> 5的簇，从每个群集中随机下采样5个尖峰序列。使用MAFFT66对准产生的73个序列。使用三叉戟评分方法67计算多个序列对齐中每个位置的保护分数，并使用MSTATX程序（https://github.com/gcollet/mstatx）进行计算。然后将保护分数映射到RBD域坐标（PDB 7LD1），并用Pymol版本2.3.5呈现图像。

　　猕猴的肺标本固定在10％中性缓冲的福尔马林中，在石蜡中加工并阻塞以进行组织学分析。将所有组织分割为5μM，并用血久毒素和曙红染色以评估组织病理学。染色切片以盲目认证的兽医病理学家的方式评估。使用Olympus BX51显微镜在光学显微镜下检查切片，并使用Olympus DP73摄像头拍摄照片。

　　按照制造商的协议，通过键Rx自动化系统（LEICA）对SARS-COV-2 Nucleocapsid抗原进行染色。将组织切片在72°C下用键脱氧溶液（Leica）脱瓦30分钟，然后用分级酒精洗涤和1×免疫洗涤（StatLab）再生。使用表位检索溶液1（Leica）进行热诱导的表位检索，并通过将组织截面加热至100°C 20分钟。在应用SARS-COV-2核素抗体之前，将过氧化物块（Leica）施加5分钟以淬灭内源性过氧化物酶活性（1：2,000，Genetex，GTX135357）。在背景中稀释抗体，以还原抗体稀释剂（安捷伦）。随后将组织与抗兔HRP聚合物（Leica）孵育，并用3,3'-二氨基苯胺的色素染色10分钟。载玻片用血久毒素染色。

　　收到了细胞系，并具有认证其身份的身份验证证书。还通过可视化细胞形态并使用流式细胞术检测细胞表面蛋白来证实细胞身份。通过每月测试，证实细胞不含支原体。

　　使用Prism GraphPad 9.0绘制数据。进行了Wilcoxon Rank-sum精确测试，以比较使用SAS 9.4（SAS Institute）的P值<0.05的组之间的差异。没有对P值进行多次比较的调整。使用R统计软件（版本4.0.0）计算50％和80％的抑制稀释（ID50和ID80）值。R包“ NPLR”用于将四参数逻辑回归曲线拟合到重复实验的平均值，并使用这些拟合来估计浓度对应于50％和80％中和。

　　有关研究设计的更多信息可在与本文有关的自然研究报告摘要中获得。