A，在分化的第2天对DPERK的免疫荧光染色，在用DMSO（媒介物对照）处理3小时后，或在Cl培养基中使用FGFR抑制剂PD173074（250 nm）。n = 4个独立的实验。B，左，QRT – PCR，用于FGF配体FGF17和FGF8在人IPS细胞分化的第1-4天。相对表达显示为相对于IPS第0天的IPS细胞的倍数变化。平均值±S.D.n = 3个生物学重复。正确，在小鼠ES细胞分化的第2-6天，FGF配体FGF8的QRT -PCR。相对表达显示为相对于第0天的ES细胞的倍数变化。平均值±S.D.n = 3个生物学重复。c，在用媒介物对照（DMSO）或250 nm PD03处理后的10小时，在源自人IPS细胞的PSM细胞中FGF靶基因SPRY4的时间表QRT-PCR。相对表达显示为相对于第0天的ES细胞的倍数变化。平均值±S.D.n = 3个生物学重复。D，在人IPS细胞（顶部）或小鼠ES细胞（底部）中衍生自DMSO或PD03（250 nm）处理的PSM细胞中DPERK的免疫荧光染色。n = 4个独立的实验。E，在源自载体对照（DMSO）或2μMXAV的人IPS细胞的PSM细胞中，DPERK（左），β-catenin和核染色（右）的免疫荧光染色。n = 4个独立的实验。比例尺，100μm。F，在用DMSO（媒介物控制），MAPK抑制剂PD0325901（250 nm）或FGFR抑制剂PD173074（250 nm）中，在clfbr培养基中，在人类培养物中，在45小时内的HES7 -ACHILLES荧光强度的代表性例子。n = 16个独立实验。G，Hes7-ACHILLES荧光强度在45小时内，在用DMSO（车辆对照），2μMXAV或CLFBR培养基中的12μMIWR-1处理的人类培养物中的小回合中。n = 3个独立实验。H，HES7-ACHILLES振荡周期，用媒介物对照（DMSO），2μMXAV，250 nm PD17或100 nm处理的单个细胞的振荡期 分化第2天250 nm或500 nm PD03。平均±S.D.单向方差分析p值（NS，不显着）：0.9929、0.4097、0.9998、0.9845和0.7425，从左至右在图上。n = 27（xav），n = 48（100 nm pd03），n = 57（所有其他）细胞。I，在分化的第2天，自动跟踪用媒介物对照（DMSO）处理（DMSO）或增加剂量的PD03（100 nm，250 nm和500 nm）的平均荧光强度曲线。平均±95％置信区间。n = 68个细胞（对照），45个细胞（100 nm），35个细胞（250 nm）或36个细胞（500 nm）。J，在人类培养物中，hes7 -achilles荧光强度曲线的代表性实例，该培养物在人类培养物中，剂量增加了PD03（100 nm，250 nm和500 nm）或媒介物对照（DMSO）。n = 8个独立实验。K，HES7 -ACHILLES振荡的数量在小型ROI中被捕前，在培养物中，PD03（100 nm，250 nm和500 nm）的培养物数量增加。单向方差分析：100 nm对250 nm，p = 0.0042;100 nm对500 nm，p = 2.0×10-5。n = 6个独立的实验。L，在振荡性方案（在停止振荡之前）在用媒介物对照（DMSO）（DMSO）或增加剂量的PD03（100 nm，250 nm和500 nm）中的振荡状态（振荡之前）的平均HES 7-荧光强度（在振荡之前）。中铰链对应于中值，下部和上部铰链对应于第一个和第三四分位数，而下部和上晶须对应于最小值和最大值。单向方差分析：控制对100 nm，p = 6.7×10-17;对照对250 nm，p = 6.5×10-21;对照对500 nm，p = 1.9×10-22;100 nm对250 nm，p = 1.1×10-17;100 nm对500 nm，p = 2.5×10-18。n = 6个独立的实验。M，代表性的HES7 -ACHILLES荧光强度曲线，用于衍生自小鼠ES细胞的PSM细胞，并用媒介物对照（DMSO），2μMXAV或100 nm，250 nm或500 nm PD03处理。n = 12（对照，XAV和100 nm PD03） 或n = 10（250 nm和500 nm PD03）独立实验。n，直方图显示了用媒介物对照（DMSO），2μMXAV，250 nm PD17或100 nm，250 nm或500 nm PD03处理的单个细胞的瞬时相位差。详细信息在方法中的“相位偏移”中给出。n固定为11,000个观察结果。o，在用250 nm PD17处理的细胞中，将平均相位差异（以度为单位）定量与对照（DMSO）细胞相对于用250 nm PD17或100 nm，250 nm或500 nm PD03处理的细胞中的小ROI。中间铰链对应于中位数，下部和上部铰链分别对应于第一个和第三四分位数，而下部和上晶须分别对应于最小值和最大值。n = 13（pd17），n = 17（100 nm），n = 7（250 nm）或n = 11（500 nm）独立实验。P，Q，用于源自人IPS细胞的PSM细胞中的环状基因Hes7（P）和LFNG（Q）的延时QRT – PCR，在对照（DMSO）和250-NM PD03条件下。治疗后立即每30分钟采集样品。相对表达显示为相对于第0天的ES细胞的倍数变化。平均值±S.D.n = 3个技术重复。R，用于评估FGF抑制作用的实验策略的概述，对带有Luvelu报告基因的原代小鼠PSM细胞的影响。将尾芽从E9.5转基因胚胎中解剖，细胞分离以在纤连蛋白微图上播种。在每个微图案中检查了Luvelu记者的振荡。S，在含有DMSO（载体对照）或增加剂量的PD03（0.4μm，0.65μm和10μm）的Clfbr培养基中培养的小鼠尾巴外植体细胞中的Luvelu荧光强度曲线。n = 2个独立实验。t，在用DMSO（媒介物对照）或增加剂量的PD03（0.4μM，0.65μm和10μm）处理的小鼠尾巴外植体细胞中停滞前的Luvelu振荡数量。平均±S.D.ANOVA的一种方式：0.4μm对0.65μm，p = 0.0642;0.4μm与10μm，p = 8.4×10-9;0.65μm与10μm，p = 2.9×10-6。n = 10个微图案（0.4μm），n = 7个微图案（0.65μm和10μm）u，在用DMSO（载体对照）处理的小鼠尾巴膨胀者细胞中培养的小鼠尾巴外植体细胞中的luvelu振荡时间平均周期，或PD03（0.4μmm，0.65μmmm，0.65μmmm，0.65μmmm，0.4μmmm，0.65μmmm）。平均±S.D.ANOVA的一种方式：对照对0.4μm，p = 0.2785;对照对0.65μm，p = 0.0658;对照对10μm，p = 2.7×10-6;0.4μm对0.65μm，p = 0.831;0.4μm与10μm，p = 3.05×10-4;0.65μm与10μm，p = 4×10-3。n = 18个微图案（DMSO），n = 16个微图案（0.4μm），n = 12个微图案（0.65μm）和n = 6个微图案（10μm）。

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